Os fixadores coagulantes, como o álcool, e aqueles de ligação cruzada, como o formaldeído,
podem causar alterações na configuração de proteínas, mascarando os determinantes
antigênicos e, consequentemente, afetando a ligação do anticorpo.
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A incubação das lâminas em uma câmara úmida é aconselhável em qualquer temperatura,
pois, se uma lâmina tratada com o anticorpo primário ficar seca, tem-se como resultado uma
coloração de fundo.
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