Questões de Concurso
Para inca
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Cell sorting pode ser realizado por deflexão eletrostática ou divergência mecânica do fluxo. Nesse caso, além de obter-se um número maior de células totais selecionadas, a quantidade relativa de células de interesse (positivas reais) é maior.
Quando se deseja obter a maior quantidade possível de células de interesse cuja ocorrência em uma amostra é em geral reduzida, pode-se realizar o cell sorting no modo operacional de enriquecimento, enrich mode, nos citômetros nos quais essa opção esteja disponível.
Todos os elementos figurados do sangue provêm de CTHs, que podem ser definidas funcionalmente, em humanos, pela presença do antígeno de superfície CD34, ausênica de CD38 e ausência de antígenos do tipo Lin (Lineage).
Na medula óssea, pode ser observada uma hierarquia local durante a maturação das CTHs. As mais imaturas (mais primitivas) encontram-se muito distantes de tecidos vasculares, enquanto que o processo de maturação faz que elas se aproximem destes.
Os lasers que podem ser utilizados para citometria de fluxo provêm dos gases argônio, hélio-neônio (mistura) e criptônio e podem emitir luz em comprimentos de onda que variam aproximadamente entre 360 nm a 560 nm.
Citômetros podem utilizar componentes mecânicos para realizar o cell sorting, como, por exemplo, braços mecânicos que se movem e coletam parte do fluxo, no caso de eventos positivos.
O sangue do cordão umbilical somente pode ser utilizado como fonte de CTHs para transplantes autólogos, pois, em casos alogênicos, tal medida elicitaria a doença do enxerto contra hospedeiro (graft-versus-host disease), por causa da diversidade celular ali presente.
O uso de detergentes fracos, como a saponina, é recomendado para a marcação de moléculas intracelulares.
Cell sorting por deflexão eletrostática depende do chamado break off point, ou seja, do ponto onde o fluxo passa a fluir gota a gota, porém independe da amplitude do transdutor.
Fluoresceína e Texas red possuem, respectivamente, as excitações máximas a 495 nm e 596 nm, e as emissões máximas a 520 nm e 570 nm.
O princípio do deslocamento de Stokes é a base para utilização de lasers e fluoróforos em citometria de fluxo.
Na medula óssea, as CTHs se encontram em um nicho, constituído em grande parte por células estromais que secretam uma matriz rica em moléculas de adesão e interleucinas, com finalidade única de prover suporte físico.
A partir de uma amostra heterogênea de células, uma subpopulação pode ser selecionada por suas características físicas e(ou) fenotípicas, tais como granulosidade e expressão de marcadores de superfície.
Nas paredes externas, em contacto com o solo, não é recomendada a incorporação de aditivos impermeabilizantes no emboço.
Na hematopoese, CTHs indiferenciadas podem dar origem a progenitoras comprometidas das linhagens linfoides ou mieloides, originando, neste caso, após ciclos de expansão e diferenciação, plaquetas, basófilos, eosinófilos, NK (natural killers) e macrófagos, entre outros.
Assumindo-se que parte da hematopoese fetal humana ocorre no fígado, do ponto de vista biológico, esse órgão poderia ser utilizado como fonte de CTHs, porém, há óbvios impedimentos éticos para tanto.
alaranjado de acridina é corante inespecífico, que pode se ligar tanto em DNA quanto em RNA, o que poderá deturpar uma análise do conteúdo de DNA por citometria de fluxo
A utilização de EGTA no tampão de preparação de células a serem marcadas com indo-1 não é recomendada porque poderá influenciar o resultado da análise.
A criopreservação de CTHs requer o uso de um agente anticongelante, como o dimetilsufóxido (DMSO), e armazenagem em freezer mecânico a !80 oC ou tanque de nitrogênio líquido.
A compensação é necessária quando são utilizados dois ou mais fluoróforos cujos espectros de emissão se sobrepõem parcialmente, independentemente de seus espectros de excitação.