Questões de Concurso Para técnico de laboratório - microscopia eletrônica

No preparo de amostras para a microscopia eletrônica de varredura, as soluções fixadoras podem ser as mesmas utilizadas na microscopia eletrônica de transmissão, mas com duas modificações essenciais. Apresenta estas modificações, com suas respectivas e corretas justificativas, a seguinte opção:

A inclusão confere consistência necessária para que a amostra seja seccionada em cortes ultrafinos. Conforme o estudo a ser realizado, é necessário escolher um tipo de resina apropriado. São resinas adequadas para estudo de localização de estruturas celulares através da imunocitoquímica:

Na reconstrução tridimensional a partir de cortes seriados, várias etapas do processamento são de vital importância para o sucesso da reconstrução da estrutura, tais como fixação, inclusão, trimagem do bloco e seleção correta da grade. A melhor condição para a visualização desses cortes seriados é a utilização da grade:

Nos últimos anos surgiram novas gerações de MEV que apresentam diferentes denominações, como, por exemplo, MEV por baixo vácuo, MEV por pressão variável, ou simplesmente MEV ambiental. O principal diferencial deste microscópio é funcionar:

Os traçadores são substâncias utilizadas na microscopia eletrônica para revelar a presença de determinadas estruturas ou compartimentos celulares. A opção que possui o traçador associado corretamente à estrutura celular a que ele reage ou que identifica é:

A opção que apresenta o melhor protocolo de processamento de material biológico para análise ao MEV convencional é:

Os elétrons responsáveis pela formação da imagem no MEV são os elétrons:

Até pouco tempo, as imagens formadas pelo MEV e MET eram bem distintas. Neste contexto, a principal característica da imagem convencional obtida por MEV é de ser:

O feixe de elétrons emitido no microscópio eletrônico de varredura convencional, que interage com a amostra, é formado a partir de um(a):

O material biológico incluído em resina epóxi, usado para análise ultraestrutural, pode ser guardado durante muito tempo sem prejuízo da amostra. Porém, para que reações imunocitoquímicas, para detecção de antígenos, sejam realizadas neste material, é necessário submetê-lo ao processo denominado desmascaramento de antígenos e sublimação, nas secções ultrafinas. Em relação às soluções abaixo relacionadas, é correto afirmar que todas podem ser usadas neste processo, EXCETO:

Os carboidratos desempenham importante papel nos sistemas biológicos, e podem estar associados a proteínas, formando complexos macromoleculares, com importante papel funcional na célula. Sua visualização, usando-se critérios morfológicos, é bastante restrita, por isso algumas técnicas foram desenvolvidas para permitir sua detecção, do ponto de vista ultraestrutural, de forma mais precisa. Pode-se afirmar que as técnicas que permitem detecção dos carboidratos para análise qualitativa e quantitativa, respectivamente, são:

A citoquímica estrutural permite a localização in situ da atividade enzimática. No entanto, estabelecer protocolos de fixação que permitam a preservação das estruturas celulares e a atividade catalítica é um desafio da técnica. São comuns os falsos resultados, nas reações para detecção da atividade de enzimas glicolíticas. Isto ocorre pelo deslocamento por difusão, em tecidos não fixados, da enzima ou do produto da reação em relação ao seu sítio de atividade. A fim de evitar estes artefatos técnicos, recomenda-se adicionar ao meio de incubação para revelar a enzima a seguinte solução:

Na detecção das desidrogenases pelo método de redução pelos sais tetrazólio, seguem-se as etapas de fixação, lavagem e revelação da ação enzimática. A fixação deve ser branda com aldeído fórmico e glutárico em baixas concentrações, durante poucos minutos, seguida de lavagem longa para retirar resíduos de aldeído livre. A incubação com solução reveladora, contendo tampão fosfato, substrato da enzima, diestiril nitrobluetetrazólio (DS-NBT), e dimetilsulfóxido (DMSO), permitirá revelar a ação enzimática. Todos os experimentos necessitam de controles negativos da reação, e para isto serão usadas as condições de incubação abaixo, EXCETO:

A resina acrílica LRWhite, que, devido a sua natureza hidrofílica, é permeável aos anticorpos utilizados para imunocitoquímica ultraestrutural, pode ser polimerizada sem acréscimo de catalizador, na seguinte condição:

Observe as afirmativas a seguir, em relação à técnica de imunocitoquímica ultraestrural, e avalie se são verdadeiras (V) ou falsas (F).

I - A técnica de “immunogold” é muito precisa e permite detecção e localização in situ da molécula alvo, além de possibilitar dupla marcação.

II - Anticorpos secundários acoplados a partículas de ouro coloidal podem ser usados para análise por microscopia de luz ou eletrônica.

III - O uso de resinas acrílicas e grades de níquel são recomendados para as reações pós-inclusão; além disto, a pós-fixação com tetróxido de ósmio deve ser evitada.

IV - Para detectar antígenos de superfície a técnica de pré-inclusão é a mais indicada.

De cima para baixo, a sequência correta é:

Alcançar a máxima preservação ultraestrutural é objetivo do processamento para microscopia eletrônica. No entanto, a fixação pode interferir na possibilidade de marcação pela técnica de imunocitoquímica ultraestrutural, e, em geral, isto se deve ao emprego da combinação de aldeídos fórmicos e glutáricos. É correto afirmar que, além das lavagens adequadas, podem-se retirar radicais aldeídicos livres pelo uso da solução:

A técnica do ácido fosfotúngstico (PTA) é uma técnica utilizada em microscopia eletrônica de transmissão para detectar:

Em relação à contrastação no processamento para microscopia eletrônica de transmissão, analise se são verdadeiras (V) ou falsas (F) as afirmativas a seguir.

I - É denominada contrastação in bloco quando a incubação com sais de metais pesados ocorre direto no corte ultrafino.

II - Acetato de uranila e citrato de chumbo são as substâncias mais empregadas na contrastação de cortes ultrafinos.

III - A contrastação com uranila deve ser feita em câmara úmida e no escuro.

IV - Para evitar precipitação pelo CO_2, é recomendado usar pérolas de NaOH na câmara de incubação do chumbo.

De cima para baixo, a sequência correta é:

Todos os fatores abaixo interferem na ultramicrotomia e resultam em cortes vibrados, EXCETO:

A ultramicrotomia é uma etapa crítica do processamento para microscopia eletrônica de transmissão e seu sucesso depende de todas as etapas anteriores. A espessura dos cortes ultrafinos é avaliada pela cor que mostram quando flutuam na superfície da água da cuba da navalha. As cores cinza, prateada, dourada e avermelhada correspondem, respectivamente, às espessuras de: