Questões de Concurso Sobre técnicas sorológicas e de imunofluorescência em biomedicina - análises clínicas

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Para o diagnóstico de sífilis, somente é recomendado o uso de testes treponêmicos que detectam anticorpos totais (IgG e IgM), pois, diferentemente de outros agravos, como a toxoplasmose, a utilização de testes que detectam isoladamente anticorpos IgM (ex.: FTA-Abs IgM) não é útil como marcador de infecção recente. Essa limitação se justifica porque, no diagnóstico de sífilis, os anticorpos IgM são detectados tanto como primeira resposta imune humoral pós-infecção quanto durante o período latente e em pacientes com doença tardia. 

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De acordo com a Organização Mundial de Saúde, o diagnóstico padrão ouro para identificação do vírus SARSCoV-2 é realizado por meio das técnicas de reação em cadeia da polimerase com transcrição reversa com amplificação em tempo real, ou RT-PCR, e sequenciamento parcial ou total do genoma viral. As amostras para esta análise podem ser obtidas por meio do aspirado nasofaríngeo, swab nasal e oral, bem como pela secreção respiratória do trato inferior, como escarro, lavado traqueal ou lavado broncoalveolar. O ideal é que a coleta seja realizada após o surgimento dos sintomas, entre o terceiro e o quinto dia. 

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 A imunofluorescência indireta é o teste de referência na sorologia de muitas doenças, como as infecciosas e autoimunes. O mesmo conjugado pode ser utilizado em sistemas diferentes. Um passo de lavagem é realizado e um anticorpo anti-humano (conjugado) marcado com substância fluorescente é adicionado. Após um segundo passo de lavagem, para remover o conjugado não ligado, a observação de fluorescência ao microscópio é indicativa da presença do anticorpo em estudo na amostra do paciente. O conjugado é isotipo-específico, sendo assim possível distinguir reações condicionadas pela presença de IgG, IgA e IgM. O teste é muito utilizado para a pesquisa de autoanticorpos em doenças difusas do tecido conjuntivo, nas vasculites sistêmicas (ANCA) e no diagnóstico de infecções pelo Treponema pallidum, Tripanosoma cruzi, para as diversas Chlamydiae.

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Apesar de não serem utilizados como primeira escolha para pesquisa da Doença de Chagas, os exames sorológicos podem ser reagentes na fase aguda, ainda no primeiro mês de infecção, o que adiciona complexidade ao diagnóstico diferencial entre as fases aguda e crônica. A metodologia recomendada para confirmação de caso agudo pela pesquisa de imunoglobulina M é a imunofluorescência indireta (IFI). Já para a pesquisa de imunoglobulina G, podem ser utilizados o ensaio de imunoabsorção enzimática (ELISA) e/ou a hemaglutinação indireta (HAI) e/ou a IFI, entre outras técnicas. 

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Os testes rápidos chegaram como uma solução prática, capaz de levar exames laboratoriais epidemiologicamente importantes até serviços de saúde que estão longe dos grandes centros de hospitais e laboratórios. Uma das metodologias utilizadas é a imunocromatografia, na qual a amostra é depositada no local indicado do exame, junto com uma solução-tampão e aguardar o tempo de reação. Em geral, essa técnica visa a detectar as Imunoglobulinas IgM e IgG, ou seja, identifica a presença dos anticorpos que são produzidos pelo organismo para combater a infecção. Essa metodologia está sendo amplamente utilizada para detecção do antígeno SARS-Cov-2 da COVID-19, sendo útil em amostra coletada até o terceiro dia de início dos sintomas.

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Logo após a descoberta do HIV, foram desenvolvidos imunoensaios (IE) para o diagnóstico da infecção. Nas últimas décadas, quatro gerações de IE foram desenvolvidas. O ensaio de quarta geração detecta simultaneamente o antígeno p24 e anticorpos específicos anti-HIV. O componente de detecção de anticorpo tem o formato de “sanduíche”; portanto, detecta todas as classes de imunoglobulinas contra proteínas recombinantes ou peptídeos sintéticos derivados das glicoproteínas gp41 e gp120/160. O componente de detecção de antígeno p24 é constituído por um anticorpo monoclonal na fase sólida (para capturar o antígeno p24 presente no soro) e de um conjugado constituído por um antissoro (anticorpo) poliespecífico contra a proteína p24. Em média, a janela diagnóstica dos ensaios de quarta geração é de aproximadamente 15 dias, dependendo do ensaio utilizado.