Questões de Concurso Público FIOCRUZ 2010 para Tecnologista em Saúde - Micobactérias

Vários sistemas foram descritos para identificação genotípica de cepas micobacterianas isoladas de espécimes clínicos, incluindo as diferentes espécies do complexo M. tuberculosis. Sobre os princípios e as aplicações dos sistemas para a identificação de micobactérias, analise as afirmativas a seguir.

I. As técnicas baseadas apenas em reação de polimerização em cadeia com iniciadores específicos para as deleções genômicas RD de M. tuberculosis como RD1, RD4, RD9, RD12, discriminam as espécies M. tuberculosis e M. bovis (incluindo a espécie M. bovis BCG) bem como outras espécies do complexo.

II. Espécies do complexo M. tuberculosis podem ser diferenciadas pelo teste AccuProbe (GenProbe Inc., San Diego, California, EUA), que consiste em sondas marcadas com éster de acridina. Esse mesmo sistema pode também ser aplicado na identificação de cepas do complexo M. avium e M. kansasii.

III. Os sistemas INNO-LiPA Mycobacteria version 2 (Innogenetics, Ghent, Bélgica) GenoType Mycobacteria (Hain Lifescience, Nehren, Alemanha) consistem em hibridização reversa de produtos de reação de polimerização em cadeia biotinilados aos seus fragmentos complementares presentes em “tiras" de membrana. Ambos permitem a identificação molecular de acima de 10 espécies de micobactérias. Uma desvantagem do sistema é a impossibilidade de uso em cepas cultivadas em meios líquidos.

Assinale:

Em 1993, Telenti e colaboradores propuseram um método para identificação molecular rápida de micobactérias com a restrição por endonucleases de uma sequência parcial do gene hsp65, seguida da análise do polimorfismo dos fragmentos resultantes, denominada PRA-hsp65. Considerando conceitos e aspectos técnicos da metodologia citada, assinale a alternativa incorreta.

Devido ao crescimento lento de algumas micobactérias, metodologias moleculares rápidas com sequenciamento de genes consistem em procedimentos adequados de aplicação em laboratórios de referência e de rotina visando a identificação de micobactérias. Sobre a aplicabilidade da técnica para a identificação de micobactérias, analise as afirmativas a seguir.

 I. Os pares M. kansasii e M. gastri, M. ulcerans e M. marinum, M. shimoidei e M. triviale, e M. abscessus e M. chelonae não podem ser diferenciados por sequências do gene rrs.

II. Em cepas cultivadas em meio sólido, a extração de DNA e a reação de polimerização em cadeia, para posterior sequenciamento gênico, apresentam resultados reprodutíveis e de precisão superior àqueles realizados a partir de cepas cultivadas em meio líquido. 

III. Para a identificação de espécies de micobactérias não tuberculosas de crescimento rápido, os alvos incluem os genes dnaJ, hsp65, gyrB, 16S rDNA, secA1, sod ou a sequência ITS 16S-23S.

Assinale: 

Dentre as novas e eficazes técnicas de detecção molecular de Mycobacterium tuberculosis, a metodologia denominada Gene XPert (Cepheid) apresenta os aspectos mais promissores, especialmente devido a redução do tempo de detecção do patógeno, inclusive da resistência a rifampicina. Sobre o tema, analise as afirmativas a seguir.

I. O método XPert MTB/RIF consiste em um método automatizado utilizando um ensaio baseado em reação de polimerização em cadeia baseado em hemi-nested real time para amplificação parcial do gene rpoB e hibridação.

II. O teste é realizado em até duas horas, utilizando uma plataforma XPert MTB/RIF com integração do processamento do espécime e PCR em um único recipiente, contendo todos os reagentes para amplificação e detecção do produto amplificado.

III. O método exige a realização de etapas de lise bacteriana e extração do DNA por meio de protocolo simplificado anterior à utilização do cartucho para amplificação e detecção do produto amplificado.

Assinale: