Em 1993, Telenti e colaboradores propuseram um método
para identificação molecular rápida de micobactérias com a
restrição por endonucleases de uma sequência parcial do
gene hsp65, seguida da análise do polimorfismo dos
fragmentos resultantes, denominada PRA-hsp65.
Considerando conceitos e aspectos técnicos da metodologia
citada, assinale a alternativa incorreta.

Question

Em 1993, Telenti e colaboradores propuseram um método
para identificação molecular rápida de micobactérias com a
restrição por endonucleases de uma sequência parcial do
gene hsp65, seguida da análise do polimorfismo dos
fragmentos resultantes, denominada PRA-hsp65.
Considerando conceitos e aspectos técnicos da metodologia
citada, assinale a alternativa incorreta. Alternativa A: Dentre as vantagens da técnica PRA-hsp65 estão: (i) a
rapidez; (ii) a possibilidade de identificação da maioria das
espécies de micobactérias incluindo cepas não identificáveis
por métodos fenotípicos ou HPLC, com exceção daquelas
pertencentes ao complexo M. tuberculosis; e (iii)
possibilidade de implantação em laboratórios públicos em
território nacional. Ou Alternativa B: A técnica envolve a amplificação parcial de um fragmento
de aproximadamente 439pb do gene codificante para a
proteína de choque térmico de 65kDa a partir do DNA
extraído das cepas isoladas. Para a reação de
polimerização em cadeia são usados os iniciadores Tb11
e Tb12. O DNA amplificado é submetido a restrição pelas
enzimas BstEII e HaeIII independentemente e eletroforese
em gel de agarose em concentração igual ou acima de
3%. A análise do tamanho dos fragmentos está disponível
nana página http://app.chuv.ch/prasite/index.html. Ou Alternativa C: O polimorfismo de outros genes conservados, de maneira
similar ao gene hsp65, já foi proposto como variações da
técnica para a identificação de micobactérias, como os
genes rpoB, dnaJ e o espaçador 16S-23S rRNA. Ou Alternativa D: A técnica PRA-hsp65, apesar de não comercializada, foi
aprovada pela Food and Drug Administration (FDA) na
última década, porém é recomendada validação efetivain-house. Ou Alternativa E: Dentre as desvantagens da metodologia PRA-hsp65
estão: (i) a não inclusão de espécies recentemente
descritas no banco de dados on-line; (ii) diferenciação
dificultada de fragmentos de restrição com dimensões
próximas após a eletroforese; (iii) subjetividade; e (iv)
identificação ambígua de espécies que compartilham de
fragmentos de restrição com as mesmas dimensões.

Drauzio Jr · Accepted Answer

Alternativa [D] A técnica PRA-hsp65, apesar de não comercializada, foi
aprovada pela Food and Drug Administration (FDA) na
última década, porém é recomendada validação efetivain-house. A alternativa incorreta é a letra A. Embora a técnica PRA-hsp65 apresente vantagens como rapidez e possibilidade de identificação da maioria das espécies de micobactérias, incluindo cepas não identificáveis por métodos fenotípicos ou HPLC, com exceção daquelas pertencentes ao complexo M. tuberculosis, a opção (iii) que afirma ser possível a implantação da técnica em laboratórios públicos em território nacional é incorreta, pois a implantação depende de recursos técnicos e financeiros específicos, além de capacitação de pessoal especializado.

Em 1993, Telenti e colaboradores propuseram um método para ...

Comentários

Clique para visualizar este comentário

Questões de assuntos semelhantes

Provas relacionadas