Questões de Concurso Público FIOCRUZ 2010 para Tecnologista em Saúde - Proteômica

Dentre os diferentes métodos de purificação de proteínas existentes, é correto afirmar que os métodos que se baseiam no peso molecular da proteína em questão para seu isolamento são:

Interessado na purificação de uma proteína recém identificada em uma nova bactéria isolada de corais (proteína PX315), você foi encarregado de estabelecer um protocolo inicial de purificação da mesma, a partir de culturas in vitro estabelecidas em laboratório. A proteína PX315 apresenta peso molecular de cerca de 20kDa, um ponto isoelétrico de 8,1, e tem capacidade de interação com RNAs. Tendo em vista seus conhecimentos sobre os métodos de purificação de proteínas e os dados disponíveis para a proteína em questão, é correto afirmar que, a ordem dos passos sequenciais mais indicados para a purificação da mesma é:

Encarregado de estabelecer um protocolo de purificação de cinco proteínas diferentes, um pesquisador realizou análises visando determinar algumas características básicas de cada um delas, que pudessem lhe indicar as melhores estratégias de purificação de cada uma delas.

 

Com base nestes dados o pesquisador optou pela realização dos seguintes passos de purificação: Inicialmente, a mistura foi aplicada em uma coluna de sepharose G50, sendo obtidas, na sequência de eluição, a fração 1 (F1, primeira a ser eluída), e a fração F2. A Fração F2 foi então aplicada em uma coluna de concanavalina. Após a aplicação do tampão de lavagem, foi obtida a fração F3 e, após aplicação do tampão de eluição, obteve-se a fração F4. Submetendo a Fração F3 à uma precipitação em sulfato de amônio, foram então obtidas a fração solúvel (F5) e a fração insolúvel (F6). A aplicação da Fração F1 em uma coluna de Poli-U, seguido da aplicação do tampão de lavagem deu então origem à fração F7 e, após a eluição final, com tampão de eluição, à fração F8.

Com base nas características das proteínas, e nos prodecimentos utilizados pelo pesquisador, assinale a alternativa que melhor identifica as frações nas quais cada uma das proteínas sera isolada de forma purificada. 

Em relação aos métodos de purificação de proteínas, cromatografia de afinidade e cromatografia de troca iônica, assinale a alternativa que lista parâmetros que interferem em ambos os processos.

Após realizar a purificação de uma proteína e a obtenção de uma fração pura desta, um estagiário realizou a quantificação do teor de proteínas presente nesta fração por meio de dois métodos clássicos de dosagem de macromoléculas: o método de Folin e o método de Lowry. Diferente do que o estagiário esperava, os resultados obtidos foram bastante discrepantes entre si, conforme tabela abaixo: 




Com base nestes resultados e nos seus conhecimentos sobre os métodos em questão, observe as afirmativas abaixo, e assinale abaixo a alternativa correta.

I. O método de Folin apresentou uma menor quantificação pois avalia a quantidade de proteínas em função da presença de alguns poucos tipos de aminoácidos que, por serem pouco abundantes na proteína em questão, levou a uma baixa detecção da mesma pelo método.

II. O método de Lowry apresenta diversos tipos de interferência, o que pode ter levado a uma super-estimativa do nível de proteínas presente na fração analisada.

III. O método de Folin, na verdade, não é um método apropriado para a detecção de proteínas, uma vez que avalia a quantidade de açúcares e não de aminoácidos.

IV. O método de Lowry quantifica as ligações peptídicas presentes na proteína avaliada e, desta forma, apresenta uma maior sensibilidade do que o método de Folin que apenas avalia a presença dos aminoácidos tirosina e triptofano.

V. O método de Folin apresenta difícil manipulação e grande variabilidade, o que resulta em uma baixa reprodutibilidade e alta taxa de erro, o que provavelmente resultou em uma sub-estimativa da quantidade de proteínas presentes na amostra.

Assinale: