Questões de Concurso Público FIOCRUZ 2010 para Tecnologista em Saúde - Proteômica
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Experimento 1 – caracterização dos elementos que regulam a expressão tecidual do gene.
Experimento 2 – expressão do gene em bactérias para purificação da proteína codificada pelo gene isolado.
Experimento 3 – isolamento de genes de proteínas que interagem com a proteína codificada pelo gene isolado através do sistema Duplo Híbrido em leveduras.
Selecione o clone que deverá ser utilizado, respectivamente, para cada um dos experimentos listados acima.
Analisando os resultados apresentados podemos concluir que os elementos reguladores responsáveis pela expressão do gene em Fígado, Coração e Neurônios estão localizados, respectivamente, entre as posições:
Com base nestes resultados, foram formuladas as seguintes afirmativas.
I. Os mutantes 1, 3 e 7 correspondem aos mutantes na via de transdução de sinal do hormônio.
II. Os mutantes 2, 4, 5 e 6 correspondem aos mutantes na via de biossíntese do hormônio.
III. Os mutantes 1, 3 e 7 correspondem aos mutantes na via de biossíntese do hormônio.
IV. Os mutantes 2, 4, 5 e 6 correspondem aos mutantes na via de transdução de sinal do hormônio.
V. Os mutantes 8, 9 e 10 correspondem a mutantes que produzem níveis elevados do hormônio, mas que não apresentam alteração da sinalização.
Assinale:
I. A adição de ubiquitina acontece sempre de forma específica, em determinados resíduos da cadeia polipeptídica.
II. A adição de ubiquitina acontece sempre de forma sequencial e rápida, de forma que são gerados sempre intermediários protéicos poli-ubiquitinados.
III. A adição de ubiquitina marca a proteína especificamente para a degradação via proteassoma.
IV. A adição de poli-ubiquitina corresponde a uma das formas de controle do tempo de via das proteínas celulares.
Assinale:
Visando purificar a proteína de interesse farmacológico (Proteína 2), você realizou uma cromatografia de gel filtração. Após acompanhar o perfil de eluição desta cromatografia, você identificou uma sequência de picos, que foram coletados e analisados. Com base nos seus conhecimentos sobre separação de proteínas, assinale a alternativa que melhor corresponde ao i.) número de picos indentificados na análise do cromatograma desta cromatografia; ii.) qual seria o pico que conteria a proteína de interesse; iii) e, no caso de existir a necessidade de passos adicionais em seu protocolo de purificação. Assinale a alternativa que indica uma opção viável de método subsequente a ser utilizado para o isolamento da proteína 2.
Com base nestes dados o pesquisador optou pela realização dos seguintes passos de purificação: Inicialmente, a mistura foi aplicada em uma coluna de sepharose G50, sendo obtidas, na sequência de eluição, a fração 1 (F1, primeira a ser eluída), e a fração F2. A Fração F2 foi então aplicada em uma coluna de concanavalina. Após a aplicação do tampão de lavagem, foi obtida a fração F3 e, após aplicação do tampão de eluição, obteve-se a fração F4. Submetendo a Fração F3 à uma precipitação em sulfato de amônio, foram então obtidas a fração solúvel (F5) e a fração insolúvel (F6). A aplicação da Fração F1 em uma coluna de Poli-U, seguido da aplicação do tampão de lavagem deu então origem à fração F7 e, após a eluição final, com tampão de eluição, à fração F8.
Com base nas características das proteínas, e nos prodecimentos utilizados pelo pesquisador, assinale a alternativa que melhor identifica as frações nas quais cada uma das proteínas sera isolada de forma purificada.
Com base nestes resultados e nos seus conhecimentos sobre os métodos em questão, observe as afirmativas abaixo, e assinale abaixo a alternativa correta.
I. O método de Folin apresentou uma menor quantificação pois avalia a quantidade de proteínas em função da presença de alguns poucos tipos de aminoácidos que, por serem pouco abundantes na proteína em questão, levou a uma baixa detecção da mesma pelo método.
II. O método de Lowry apresenta diversos tipos de interferência, o que pode ter levado a uma super-estimativa do nível de proteínas presente na fração analisada.
III. O método de Folin, na verdade, não é um método apropriado para a detecção de proteínas, uma vez que avalia a quantidade de açúcares e não de aminoácidos.
IV. O método de Lowry quantifica as ligações peptídicas presentes na proteína avaliada e, desta forma, apresenta uma maior sensibilidade do que o método de Folin que apenas avalia a presença dos aminoácidos tirosina e triptofano.
V. O método de Folin apresenta difícil manipulação e grande variabilidade, o que resulta em uma baixa reprodutibilidade e alta taxa de erro, o que provavelmente resultou em uma sub-estimativa da quantidade de proteínas presentes na amostra.
Assinale: