Questões de Concurso Público FIOCRUZ 2010 para Tecnologista em Saúde - Proteômica
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I. A utilização de detecção por fluorescência aumenta o poder de resolução de proteínas em gel, mas é um método laborioso e que introduz a manipulação de reagentes perigosos, que aumentam o risco de exposição e biossegurança nos laboratórios e que detectam apenas uma fração das proteínas presentes nas amostras.
II. A utilização de marcação radioativa é relevante apenas quando estão sendo realizadas análises proteômicas baseadas em modificações pós-traducionais das proteínas.
III. As técnicas de marcação fluorescente e radioativa aumentam o poder de resolução das análises proteômicas, entretanto requerem etapas anteriores de incubação com compostos apropriados.
Assinale:
I. A faixa de detecção linear dinâmica dos métodos de detecção de proteínas por fluorescência em eletroforeese em gel é normalmente superior aos métodos de coloração tradicional.
II. Corantes de proteínas por fluorescência do tipo SYPRO são fáceis de serem aplicados, por meio de uma única etapa de coloração de 30 a 60 minutos, sem a necessidade de descoloração.
III. Os corantes de flurorescência detectam em geral pequenas quantidades de proteínas (4-8ng) e existem metodologias para sua quantificação através de análises de imagens.
Com relação às afirmativas acima, assinale abaixo a alternativa correta.
Assinale:
I. Na primeira etapa, o polipeptídeo em estudo reage com PITC, que se acopla ao grupo NH2 livre do aminoácido 1.
II. Na segunda etapa, ocorre a hidrólise ácida da proteína conjugada com PITC, que libera a feniltiohidantoína (PTH) do aminoácido 1 e o restante do polipeptídeo, tornando o aminoácido 2 o novo resíduo N-terminal.
III. Na terceira etapa, a análise cromatográfica do PTHaminoácido é realizada.
Assinale:
I. A análise do proteoma de uma organela é limitada em função da perda de proteínas durante o processo de preparação das amostras.
II. O alto grau de conservação entre proteínas presentes em cloroplastos e mitocôndrias, assim como sua conservação com proteínas presentes em outros compartimentos celulares, dificulta a identificação das mesmas nos proteomas organelares.
III. Proteínas de membrana estão sempre representadas em baixa proporção, o que limita a identificação destas na abordagem proteômica.
IV. Proteínas destas organelas sofrem proteólise durante seu processo de importação para as organelas, o que limita sua identificação final.
Assinale:
I. A largura do pico detectado (avaliada na sua base), dividida pela massa do pico, define a resolução espectrométrica de um aparelho de determinação de massa.
II. A introdução do sistema Orbitrap aumentou bastante a resolução espectrométrica em relação aos sistemas IonTraps simples, anteriormente utilizados.
III. Quanto maior a resolução espectrométrica, maior a chance de mais de um peptídeo serem agrupados em um mesmo pico.
IV. Uma alta resolução espectrométrica é uma pré-condição para a identificação e quantificação acurada dos peptídeos.
Assinale:
I. Análise proteômica global de cloroplastos isolados a partir de gradientes de densidade.
II. Análise do proteoma da membrana externa cloroplastidial, utilizando frações de membrana externa isolada a partir de extratos purificados obtidos de cloroplastos purificados em gradiente de densidade.
III. Análise proteômica da fração solúvel de cloroplastos isolados em gradiente de densidade.
IV. Análise do proteoma da membrana interna cloroplastidial, utilizando frações de membrana externa isolada a partir de extratos purificados obtidos de cloroplastos purificados em gradiente de densidade.
V. Análise do proteoma da membrana tilacóide, utilizando frações de membrana tilacóide isolada a partir de extratos purificados obtidos de cloroplastos purificados em gradiente de densidade.
Tendo em vista o custo das análises e o tempo necessário para sua realização, o laboratório só poderia realizar duas destas estratégias. Visando obter a maior quantidade de dados relacionados à composição dos cloroplastos desta espécie, assinale a alternativa que melhor descreve as abordagens que deveriam ser realizadas prioritariamente.
Assinale:
I. Em um equipamento Q-TOF, um filtro de massa quádruplo está acoplado a uma analisador de tempo de vôo que diferencia as moléculas presentes em função do tempo de sua chegada ao detector.
II. Após a ionização por eletrospray, a relação massa/carga das moléculas é determinada por meio de sua trajetória em um campo elétrico estático ou dinâmico.
III. No sistema IonTrap, os íons são capturados em um campo onde eles podem ser acumulados e manipulados em análises subsequentes.
IV. No sistema Orbitrap, os íons circulam ao redor de um eletrodo central com formato fusiforme. A frequência de oscilações dos íons nesta trajetória é proporcional à raiz quadrada da razão m/z.
Assinale:
I. Na ionização por eletrospray, os peptídeos a serem analisados são dissolvidos em um líquido que passa por uma agulha, a um alto potencial elétrico. A voltagem aplicada dispersa o líquido em pequenas gotículas, altamente carregadas, que evaporam e transferem as moléculas para o vácuo de um espectrômetro de massas.
II. O aparelho Ion Trap-Orbitrap é um espectrômetro de massa híbrido, que combina um Ion Trap linear com um analisador Orbitrap. O Orbitrap é um tipo de analisador de massa de Ion Trap que utiliza transformada de Fourier, no qual os íons oscilam ao longo e ao redor de um cilindro central.
III. A dissociação induzida por colisão (CID) consiste na fragmentação de íons peptídicos pela energia adquirida durante a colisão com um gás quimicamente reativo.
IV. A marcação isotópica estável por aminoácidos em culturas de células (SILAC) é um dos tipos de marcação metabólica utilizada na proteômica quantitativa. Comumente, formas dos aminoácidos lisina e arginina, marcados com 33P e 35S, são incorporados em uma cultura celular ou em organismo através da marcação metabólica. Na análise por espectrometria de massa, os aminoácidos marcados com esses isótopos pesados são distinguíveis dos seus correlatos não marcados por uma mudança de massa característica.
Assinale: