Questões de Concurso Público FIOCRUZ 2010 para Tecnologista em Saúde - Proteômica

Encarregado de realizar a purificação de uma proteína de interesse farmacológico, você chegou a um protocolo de purificação que resulta em uma mistura de quatro proteínas, com as seguintes características:

 

Visando purificar a proteína de interesse farmacológico (Proteína 2), você realizou uma cromatografia de gel filtração. Após acompanhar o perfil de eluição desta cromatografia, você identificou uma sequência de picos, que foram coletados e analisados. Com base nos seus conhecimentos sobre separação de proteínas, assinale a alternativa que melhor corresponde ao i.) número de picos indentificados na análise do cromatograma desta cromatografia; ii.) qual seria o pico que conteria a proteína de interesse; iii) e, no caso de existir a necessidade de passos adicionais em seu protocolo de purificação. Assinale a alternativa que indica uma opção viável de método subsequente a ser utilizado para o isolamento da proteína 2. 

Dentre os diferentes métodos de purificação de proteínas existentes, é correto afirmar que os métodos que se baseiam no peso molecular da proteína em questão para seu isolamento são:

Interessado na purificação de uma proteína recém identificada em uma nova bactéria isolada de corais (proteína PX315), você foi encarregado de estabelecer um protocolo inicial de purificação da mesma, a partir de culturas in vitro estabelecidas em laboratório. A proteína PX315 apresenta peso molecular de cerca de 20kDa, um ponto isoelétrico de 8,1, e tem capacidade de interação com RNAs. Tendo em vista seus conhecimentos sobre os métodos de purificação de proteínas e os dados disponíveis para a proteína em questão, é correto afirmar que, a ordem dos passos sequenciais mais indicados para a purificação da mesma é:

Encarregado de estabelecer um protocolo de purificação de cinco proteínas diferentes, um pesquisador realizou análises visando determinar algumas características básicas de cada um delas, que pudessem lhe indicar as melhores estratégias de purificação de cada uma delas.

 

Com base nestes dados o pesquisador optou pela realização dos seguintes passos de purificação: Inicialmente, a mistura foi aplicada em uma coluna de sepharose G50, sendo obtidas, na sequência de eluição, a fração 1 (F1, primeira a ser eluída), e a fração F2. A Fração F2 foi então aplicada em uma coluna de concanavalina. Após a aplicação do tampão de lavagem, foi obtida a fração F3 e, após aplicação do tampão de eluição, obteve-se a fração F4. Submetendo a Fração F3 à uma precipitação em sulfato de amônio, foram então obtidas a fração solúvel (F5) e a fração insolúvel (F6). A aplicação da Fração F1 em uma coluna de Poli-U, seguido da aplicação do tampão de lavagem deu então origem à fração F7 e, após a eluição final, com tampão de eluição, à fração F8.

Com base nas características das proteínas, e nos prodecimentos utilizados pelo pesquisador, assinale a alternativa que melhor identifica as frações nas quais cada uma das proteínas sera isolada de forma purificada. 

Em relação aos métodos de purificação de proteínas, cromatografia de afinidade e cromatografia de troca iônica, assinale a alternativa que lista parâmetros que interferem em ambos os processos.