O crescimento de células de origem animal em um meio nutric...

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Q568019 Técnicas em Laboratório
O crescimento de células de origem animal em um meio nutricional completo é usualmente ótimo quando o meio é tamponado em uma faixa de pH entre 7,2 a 7,4. Vários tampões podem ser utilizados para este fim, sendo que os que funcionarão de forma mais eficiente são aqueles cujo pKa está o mais próximo possível da faixa de pH requerida. Dentre os tampões descritos abaixo que podem ser comumente utilizados em cultivo de células animais, assinale aquele em que um dos componentes do sistema de tamponamento está em fase gasosa.
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HEPES, ácido 2-[4-(2-hidroxietil)-piperazin-1-il]-etanossulfónico, é um composto orgânico que funciona como agente tamponante, quando na forma de zwitterião. Trata-se de uma das 20 soluções tampão de Good (soluções tampão ideais para investigação em Biologia e Bioquímica). É um sólido branco cristalino com fórmula molecular C8H18O4S e massa molar 238,3012 g / mol. Tem um ponto de fusão de 234-238 ºC e uma solubilidade em água de 40 g por 100 mL de solvente. Tem dois valores de pKa – 3,0 e 7,5 – podendo ser usado como solução tampão para valores de pH entre 2,5 e 3,5 ou entre 6,8 e 8,2. Dado que pode ser usado como tampão a pH fisiológico, o HEPES é muito utilizado em cultura de células. A dissociação deste composto diminui com a temperatura, fazendo deste um agente tamponante bastante eficiente na manutenção da estrutura e função das enzimas a baixas temperaturas. Lepe-Zuniga et al. (1987) descreveu que o HEPES apresenta fototoxicidade, pois quando exposto à luz ambiente origina peróxido de hidrogénio. Deve-se, portanto, guardar soluções que contenham HEPES protegidas da luz

O tampão fosfato, pH 7,2 é utilizado para a preparação de espaços em branco de diluição microbiológica em ambiente laboratorial. O tampão fosfato, pH 7,2 não se destina a ser utilizado no diagnóstico de doenças ou outras condições em seres humanos.

O sangue humano é um sistema-tampão ligeiramente básico, ou seja, é um líquido tamponado: seu pH permanece constante entre 7,35 e 7,45. Um dos tampões mais interessantes e importantes no sangue é formado pelo ácido carbônico (H2CO3) e pelo sal desse ácido, o bicarbonato de sódio (NaHCO3).

Tris é um dos tampões mais comuns em química e uma unanimidade na biologia molecular. A idéia por trás de de um tampão é que você tenha um composto que tome um próton (hidrogênio) em um certo pH, usualmente próximo da neutralidade, tendo metade das moléculas com o próton e metade sem, e você terá uma solução que se manterá fixa em um pH. O tampão Tris funciona em uma faixa acima de pH 8, o que é um tanto básico, mas não de todo ruim. É bastante transparente à luz UV, é solúvel em água e barato. Esta última característica, talvez seja a melhor; normalmente são adquiridas grandes quantidades do produto.
Por razões, que são em parte históricas, o Tris é comum em eletroforese de DNA em gel. No entanto algumas empresas oferecem alternativas. Os dois tampões mais comuns em eletroforese são o TAE ( tris-acetato-EDTA) e TBE (tris-borato-EDTA); alternativas existem no uso de somente borato, mas este nem sempre é eficiente.

 

 

 

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