A fim de garantir a homogeneidade e a reprodutibilidade da
experimentação envolvendo culturas celulares, é necessário
que, antes da utilização de células para montagem de
experimentos, seja realizada a contagem das mesmas.
Todas as afirmativas abaixo se relacionam ao procedimento
correto de contagem e ao cálculo do número de células em
uma suspensão, exceto uma. Assinale-a.

Question

A fim de garantir a homogeneidade e a reprodutibilidade da
experimentação envolvendo culturas celulares, é necessário
que, antes da utilização de células para montagem de
experimentos, seja realizada a contagem das mesmas.
Todas as afirmativas abaixo se relacionam ao procedimento
correto de contagem e ao cálculo do número de células em
uma suspensão, exceto uma. Assinale-a. Alternativa A: A contagem das células é realizada após a pipetagem de
um pequeno volume da suspensão celular em uma
lâmina de vidro especial denominada câmara de
Neubauer. A parte central desta câmara é dividida em
duas superfícies separadas, cada uma dividida em um
grid composto por nove quadrados, cada um com 1mm
de lado. Antes de se colocar a suspensão de células a
parte central da câmara é coberta por uma lamínula,
formando um espaço entre a câmara e a lamínula de
0,1mm. Logo o volume determinado para cada quadrado
é igual a 0,1mm3
. Ou Alternativa B: Com o objetivo de que sejam contadas somente as
células viáveis em uma suspensão celular, antes de
pipetar esta suspensão na câmara de Neubauer, esta é
colocada em contato com uma solução de Azul de
Tripan. Somente as células vivas excluem o corante vital
azul de tripan, logo as células não viáveis poderão ser
distinguidas das demais por apresentarem coloração
azul. Ou Alternativa C: O procedimento de contagem de células é equivalente
tanto para células aderentes quanto para células
cultivadas em suspensão, a única diferença é na
preparação das células, enquanto as primeiras devem ser
inicialmente tripsinisadas, as segundas devem ser
somente homogeneizadas. Ou Alternativa D: Após misturar-se volumes iguais de uma suspensão
celular e de uma solução de azul de tripan a 1%, realizou-se
a contagem de células nos quatro quadrados dos
cantos do grid. Após a exclusão das células não viáveis,
obteve-se um total de 150 células. Logo, a concentração
destas células na suspensão original é 3,75 × 105
células/mL. Ou Alternativa E: Na contagem das células, pode-se utilizar o quadrado
central ou os quatro quadrados dos cantos de 1 grid.
Quando utilizar os quatro quadrados dos cantos, o valor
da contagem deve ser a média das contagens de cada
um dos quadrados.

Drauzio Jr · Accepted Answer

Alternativa [D] Após misturar-se volumes iguais de uma suspensão
celular e de uma solução de azul de tripan a 1%, realizou-se
a contagem de células nos quatro quadrados dos
cantos do grid. Após a exclusão das células não viáveis,
obteve-se um total de 150 células. Logo, a concentração
destas células na suspensão original é 3,75 × 105
células/mL. A alternativa D é a única que não se relaciona corretamente ao procedimento de contagem e cálculo de número de células em uma suspensão. Ela afirma que, após a contagem de 150 células viáveis após a mistura com a solução de azul de tripan a 1%, a concentração das células na suspensão original é 3,75 × 105 células/mL. No entanto, essa conclusão é errada pois não é fornecida nenhuma fórmula ou método para calcular a concentração de células a partir do número de células contadas. Além disso, o valor 3,75 × 105 células/mL parece ser arbitrário e não tem qualquer relação evidente com o número de células contadas (150 células). Portanto, a afirmação não é correta no contexto do procedimento de contagem de células. As demais alternativas A, B, C e E descrevem corretamente diferentes aspectos do procedimento de contagem de células.

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