O estabelecimento de uma reação de PCR para o
diagnóstico molecular de agentes infecciosos a partir de
amostras biológicas muitas vezes apresenta como maior
dificuldade a amplificação específica do fragmento genômico
do patógeno de interesse. As afirmativas a seguir enumeram
possibilidades para aumentar a especificidade da reação.
I. Aumento da concentração de deoxinucleotídeo na reação
de PCR.
II. Aumento da concentração da DNA polimerase na reação
de PCR.
III. Realização de reações de PCR aninhadas (PCR-nested),
utilizando par de iniciadores mais externos à região de
interesse na primeira reação, seguido da utilização de par
de iniciadores mais internos.
Assinale:

Question

O estabelecimento de uma reação de PCR para o
diagnóstico molecular de agentes infecciosos a partir de
amostras biológicas muitas vezes apresenta como maior
dificuldade a amplificação específica do fragmento genômico
do patógeno de interesse. As afirmativas a seguir enumeram
possibilidades para aumentar a especificidade da reação.
I. Aumento da concentração de deoxinucleotídeo na reação
de PCR.
II. Aumento da concentração da DNA polimerase na reação
de PCR.
III. Realização de reações de PCR aninhadas (PCR-nested),
utilizando par de iniciadores mais externos à região de
interesse na primeira reação, seguido da utilização de par
de iniciadores mais internos.
Assinale:  Alternativa A: se somente a afirmativa I estiver correta. Ou Alternativa B: se somente a afirmativa II estiver correta. Ou Alternativa C: se somente a afirmativa III estiver correta. Ou Alternativa D: se somente as afirmativas I e II estiverem corretas. Ou Alternativa E: se todas as afirmativas estiverem corretas.

Jethe Filho @jethefilho · Accepted Answer

Alternativa [C] se somente a afirmativa III estiver correta. Uma vez que o quesito pediu para "aumentar a especificidade da reação", de cara é possível cancelar os íteis I e II, visto que a DNA Polimerase e os deoxirribonucleotídeos são inespecíficos. Eles podem, talvez, alterar a sensibilidade.

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