Em uma mistura de reação de PCR (Polymerase Chain Reaction),...

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Q573598 Técnicas em Laboratório
Em uma mistura de reação de PCR (Polymerase Chain Reaction), concentrações elevadas de desoxirribonucleotídeos trifosfatados (dNTPs) interferem no processo, pois:
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atuam como quelantes de íons de magnésio.

Os reagentes cloreto de magnésio e deoxinucleotídeos podem também influenciar drasticamente o funcionamento de uma reação de PCR.

O cloreto de magnésio funciona como cofator da enzima DNA polimerase podendo afetar as temperaturas de desnaturação das fitas de DNA e o anelamento dos primers. Além disso, altas concentrações desse reagente podem ser responsáveis pelo aparecimento de produtos inespecificos formados pelo aumento excessivo da atividade enzimática e pela formação de dímeros de primers.

Os deoxinucleotídeos são fundamentas para a construção das novas cadeias a cada ciclo da PCR e devem estar presentes em iguais concentrações. Elevadas concentrações desse reagente podem afetar a especificidade dos primers.

As reações de PCR normalmente contêm um vasto excesso de dNTPs, aumentar sua concentração acima de certa valores geralmente não é útil.

Os desoxi-NTPs quelam o magnésio, alterando assim a concentração ótima efetiva de magnésio. Além disso, concentrações de dNTP maiores que 200 mM aumentam a taxa de erro da polimerase e concentrações milimolares de dNTPs na verdade inibem a Taq DNA polimerase.

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