Nested-PCR ou PCR “aninhado” é melhor definido como:

A alternativa A é a correta.

Nested-PCR, ou PCR "aninhado", é uma técnica de amplificação de DNA que busca aumentar a sensibilidade e especificidade da reação. Isso é feito através da realização de duas reações de PCR sequenciais. Na primeira reação, um par de primers externos é utilizado. O produto dessa primeira PCR é então utilizado como molde para uma segunda reação, que utiliza um par de primers internos, localizados dentro da região amplificada na primeira etapa.

A técnica é particularmente útil quando as amostras são de baixa qualidade ou contêm uma quantidade muito pequena de DNA-alvo, pois a dupla amplificação reduz a probabilidade de amplificação inespecífica e aumenta as chances de se detectar a sequência-alvo desejada.

Vamos analisar as alternativas incorretas:

B - Esta descrição refere-se à RT-PCR (Reverse Transcription PCR), que envolve a transcrição reversa do RNA para formar cDNA, que é então amplificado. Não é o mesmo que a técnica de Nested-PCR.

C - Esta alternativa descreve a qPCR (quantitative PCR), também conhecida como PCR em tempo real, que integra a amplificação com a detecção e quantificação de fluorescência em uma única etapa. Novamente, essa é uma técnica diferente da Nested-PCR.

D - A descrição aqui se refere a uma técnica que incorpora um controle interno de RNA, o que não é característico da Nested-PCR. Essa técnica descrita pode se referir a métodos que visam aumentar a precisão do teste, mas não é relacionada diretamente à definição de Nested-PCR.

Portanto, a alternativa A é a que melhor define a Nested-PCR, destacando sua funcionalidade em melhorar a especificidade e a sensibilidade da amplificação em condições desafiadoras.

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