A eletroforese é uma técnica usada em bioquímica, genética e...
Gabarito comentado
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A alternativa correta é a alternativa E.
Explicação sobre a técnica de eletroforese em gel de poliacrilamida com duodecil sulfato de sódio (SDS-PAGE):
A SDS-PAGE é uma técnica amplamente utilizada para a separação de proteínas com base em seu tamanho. Este método envolve a utilização de um detergente aniônico, o SDS (duodecil sulfato de sódio), que denatura as proteínas, conferindo-lhes uma carga negativa uniforme. Além disso, o SDS também interrompe as interações não covalentes, garantindo que a separação das proteínas ocorra com base apenas em seu tamanho.
Alternativas e seus comentários:
A: Esta alternativa está correta. De fato, a SDS-PAGE é utilizada para a separação de proteínas de acordo com seu tamanho. As proteínas menores migram mais rapidamente através da malha do gel, enquanto as maiores encontram mais resistência.
B: Esta alternativa está correta. O SDS é um detergente aniônico que desnatura as estruturas secundárias e terciárias de proteínas (que não são mantidas por ligações dissulfeto) e aplica uma carga negativa em cada proteína proporcional à sua massa.
C: Esta alternativa está incorreta e é a afirmativa errada da questão. Na SDS-PAGE, a corrente elétrica aplicada faz com que as proteínas carregadas negativamente migrem em direção ao ânodo (polo positivo), e não ao catodo (polo negativo). Esse é um ponto crucial para a compreensão correta do processo.
D: Esta alternativa está correta. Na preparação da técnica, duas camadas de poliacrilamida são polimerizadas entre duas placas de vidro, independentemente do sistema utilizado.
E: Esta alternativa está correta. As proteínas podem ser aquecidas em presença de um agente redutor, como o betamercaptoetanol (BME), para quebrar pontes dissulfeto, e o persulfato de amônio é utilizado como iniciador na polimerização do gel de poliacrilamida, embora não seja um agente redutor.
Espero que esta explicação tenha ajudado você a entender melhor os conceitos e a técnica de SDS-PAGE. Se tiver mais dúvidas ou precisar de outras informações, estou à disposição!
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Comentários
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Verifique os reagentes utilizados para polimerizar a acrilamida. Um gel de poliacrilamida é formado por polimerização de uma mistura líquida, que consiste em bis-acrilamida e acrilamida. Persulfato de amônio e TEMED são adicionados à acrilamida, para catalisar a formação do gel. Tipicamente, a acrilamida deve mostrar sinais de polimerização (formação de gel) 15 minutos após o persulfato de amônio e o TEMED forem adicionados. Polimerização que ocorre muito rapidamente é o resultado de grandes quantidades de persulfato de amônio. Quando em quantidade insuficiente, pode causar a polimerização incompleta ou desigual.
Persulfato de amônio não é agente redutor!!!! o Persulfato de amônio é utilizado para a polimerização de géis de poliacrilamida, liberando radicais livres no meio que darão origem à polimerização. Esse processo é catalisado pelo TEMED
A letra C também não está correta.
Se as proteínas são carregadas negativamente, elas migram do catodo para o anodo. O anodo é o polo positivo.
Se eu estiver enganado, favor me corrijam.
Como as proteínas são carregadas NEGATIVAMENTE e vão em direção ao CÁTODO (negativo) ?
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