Assinale:

A alternativa correta é a alternativa D.

Vamos analisar cada uma das afirmativas para entender por que essa é a resposta correta:

I. Na eletroforese bidimensional, o processo de separação é feito em duas etapas sendo a primeira delas chamada de isoeletrofocalização, processo baseado no fato de que a carga da molécula de proteína varia com o pH da solução em que ela se encontra.

Essa afirmativa está correta. Na eletroforese bidimensional, a primeira etapa realmente é a isoeletrofocalização. Nesse processo, as proteínas são separadas com base no seu ponto isoelétrico (pI), que é o pH no qual a proteína não possui carga líquida. Quando submetidas a um gradiente de pH, as proteínas migram até o ponto onde suas cargas líquidas são zero. Isso confirma o princípio de que a carga da molécula de proteína varia conforme o pH da solução.

II. Na eletroforese bidimensional, a segunda etapa de purificação consiste em submeter as proteínas separadas na primeira etapa a um segundo processo eletroforético em direção oposta ao primeiro.

Essa afirmativa está incorreta. A segunda etapa da eletroforese bidimensional não envolve a migração das proteínas em uma direção oposta. Na verdade, após a isoeletrofocalização, as proteínas são sujeitas a uma eletroforese em gel de SDS-PAGE (Dodecil Sulfato de Sódio - Poliacrilamida), onde são separadas com base em seu tamanho molecular. A direção da migração aqui é geralmente perpendicular à direção da isoeletrofocalização, não oposta, o que invalida essa afirmativa.

III. A separação de proteínas na primeira etapa da eletroforese bidimensional se baseia na carga das moléculas que migram em um gel de poliacrilamida com duodecil sulfato de sódio (SDS-PAGE) submetido a um gradiente de pH.

Essa afirmativa está incorreta. Na primeira etapa, como mencionado na afirmativa I, a separação é baseada no ponto isoelétrico das proteínas e é realizada por isoeletrofocalização, não por SDS-PAGE. O SDS-PAGE é utilizado na segunda etapa para separar as proteínas de acordo com seu tamanho molecular e não está envolvido na separação por carga que ocorre na primeira etapa.

Com base na análise das afirmativas:

• A afirmativa II está incorreta, pois descreve erroneamente a segunda etapa da eletroforese bidimensional.
• A afirmativa III está incorreta, pois mistura conceitos de isoeletrofocalização e SDS-PAGE.
• Somente a afirmativa I está correta, descrevendo adequadamente a primeira etapa do processo.

Portanto, a alternativa correta é alternativa D, que indica que apenas a afirmativa I está correta.