Dentre as sentenças abaixo, selecione aquela que descreve u...

a)Resfriamento da amostra a 16 °C por 30 segundos a cada ciclo. (ERRADA) O resfriamento necessário para o anelamento é entre 30 e 65°C. 

GABARITO A - Não tem etapa de resfriamento a cada ciclo.

As etapas da PCR são:

Desnaturação--> Anelamento--> Extensão.

A PCR ocorre por ciclos de temperatura controlada por um termociclador.

Em alguns casos, pode ocorrer uma etapa de desnaturação inicial e outra de extensão final. No caso, o programa seria:

Etapa 1: desnaturação inicial (normalmente 95°C por 5 min)

Etapa 2: Ciclos: entre 20-40

Desnaturação (95°C): temperatura elevada para romper as ligações de hidrogênio e expor o gene alvo. Lembrando que quanto mais porcentagem de CG no DNA, maior o tempo dessa etapa.

Anelamento (~55°C): temperatura diminui para ocorrer o anelamento dos primers no gene alvo.

Extensão (72°C): temperatura aumenta novamente, para o ponto ótimo de funcionamento da enzima Taq DNA polimerase (termoestável). Aqui ocorre a inserção dos dNTPs para amplificação do gene alvo.

Etapa 3: extensão final (72°C por 5 min)

Como pode-se observar, a PCR não faz resfriamento, como indicado na letra A.