A técnica Polymerase Chain Reaction (PCR) foi muito divulgad...
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Gabarito comentado
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Vamos entender a questão e as alternativas oferecidas. A pergunta é sobre as etapas comuns da técnica de Polymerase Chain Reaction (PCR). Esta técnica é amplamente utilizada em estudos moleculares e ganhou destaque durante a pandemia do Sars-Cov-2.
A alternativa correta é a B - Inicialização, Desnaturação, Anelamento e Extensão.
Explicação: A PCR é uma técnica de amplificação de DNA que segue uma sequência de etapas específicas para replicar o material genético. Vamos analisar cada uma delas:
Inicialização: Esta etapa é opcional e é utilizada para ativar algumas enzimas que necessitam de uma fase de pré-aquecimento. Não é obrigatória em todos os protocolos de PCR, mas, quando presente, é a primeira etapa.
Desnaturação: Nesta etapa, a mistura de reação é aquecida a uma temperatura elevada (geralmente 94-98°C) para separar as duas fitas da molécula de DNA, criando fitas simples que servirão de molde.
Anelamento: Depois de desnaturar o DNA, a temperatura é reduzida (geralmente entre 50-65°C) para permitir que os primers se liguem (ou anelem) às sequências complementares no DNA de fita simples.
Extensão: Nesta fase, a temperatura é ajustada para a ação ótima da DNA polimerase (geralmente cerca de 72°C). A enzima adiciona nucleotídeos aos primers para sintetizar novas fitas de DNA, completando a replicação.
Agora, vamos entender por que as outras alternativas estão incorretas:
A - Inicialização, Anelamento, Desnaturação e Extensão: Esta alternativa está errada porque a ordem correta da PCR requer que a desnaturação ocorra antes do anelamento.
C - Inicialização, Desnaturação, Extensão e Anelamento: Esta alternativa inverte a ordem de anelamento e extensão. A extensão deve ocorrer após o anelamento.
D - Inicialização, Extensão, Desnaturação e Anelamento: Esta alternativa está errada pois coloca a extensão antes da desnaturação e do anelamento, o que não é a sequência correta.
E - Desnaturação, Inicialização, Anelamento e Extensão: Esta alternativa coloca a inicialização após a desnaturação, mas a inicialização, quando utilizada, deve ocorrer no início do ciclo.
Em resumo, a alternativa B é a correta porque segue a ordem Inicialização, Desnaturação, Anelamento e Extensão, que é a sequência correta para a técnica de PCR.
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Comentários
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DESNATURAÇÃO
> A dupla fita é aberta por atuação da temperatura
ANELAMENTO OU HIBRIDIZAÇÃO
> Um par de iniciadores ou primers (uma fita de DNA específica para o gene que se quer estudar) complementam a fita oposta da sequência de DNA a ser amplificada.
> O molde é determinado pela posição dos iniciadores que se anelam a fita. Essa etapa ocorre a uma temperatura de 60°C.
EXTENSÃO OU POLIMERIZAÇÃO
- > Extensão/polimerização → 72 °C: Depois de elevada a temperatura a Taq polimerase estende os primers, sintetizando novas fitas de DNA. (CORRIGIDO PELA COLEGA NOS COMENTÁRIOS)
[ATENÇÃO] ETAPA INCOMUM EM QUESTÕES: Inicialização, Desnaturação, Anelamento e Extensão.
O que seria a etapa de inicialização?
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