“A PCR é amplamente utilizada na biologia molecular para am...

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Q3155575 Farmácia
“A PCR é amplamente utilizada na biologia molecular para amplificação de DNA, sendo essencial em diagnósticos e pesquisa” (Mullis & Faloona, 1986). Durante a realização de uma PCR, um pesquisador percebe que os produtos amplificados não correspondem ao tamanho esperado. Qual poderia ser a causa desse problema técnico?
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Comentários

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A) O uso de primers que não são específicos para a região do DNA-alvo pode levar à amplificação de sequências indesejadas, resultando em produtos de tamanhos variados e não correspondentes ao esperado. Isso pode ocorrer se os primers se ligarem a regiões semelhantes em diferentes locais do DNA ou se houver homologia com outras sequências no genoma.

B) Substituição do DNA polimerase por RNA polimerase.

RNA polimerase não amplifica DNA. A PCR requer uma DNA polimerase para a amplificação.

C) Inclusão de baixa concentração de íons magnésio (Mg²⁺).

O magnésio é um cofator essencial para a atividade da DNA polimerase, mas a baixa concentração geralmente resulta em uma eficiência de amplificação reduzida, não necessariamente em produtos de tamanhos inesperados.

D) Ausência de nucleotídeos trifosfatados (dNTPs) na reação.

Sem dNTPs, a PCR não ocorreria, mas isso resultaria em nenhuma amplificação, não em produtos de tamanhos inesperados.

E)Uso de termociclador com temperatura fixa durante todo o protocolo.

Isso impediria a PCR de ocorrer corretamente, mas novamente, isso resultaria em nenhuma amplificação, não em produtos de tamanhos inesperados.

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