Atualmente é possível monitorar a expressão diferencia...

A alternativa correta é a E - cDNA obtido do mRNA das células.

O tema desta questão envolve a compreensão da técnica de microarranjos (microarrays), que é uma ferramenta poderosa na genômica funcional para analisar a expressão de milhares de genes simultaneamente. Essa técnica permite que os pesquisadores investiguem padrões de expressão gênica em diferentes amostras, como por exemplo, comparar células normais com células tumorais. Para realizar essa técnica, é necessário usar sondas que se ligam especificamente a sequências complementares de DNA ou RNA nas amostras testadas.

As opções A e B não são adequadas, pois proteínas totais e DNA total não refletem a expressão gênica atual da célula. Já o RNA total incluiria também RNA ribossômico e RNA transportador, o que não corresponde exatamente aos genes ativamente transcritos em mRNA. A opção D, mRNA total, parece uma resposta possível, pois o mRNA reflete a expressão gênica; contudo, este RNA pode ser instável e difícil de manusear.

Por sua vez, a alternativa E é a correta porque o cDNA (DNA complementar) é obtido pela transcrição reversa a partir do mRNA. O cDNA é mais estável que o mRNA e não contém introns, sendo uma representação mais fidedigna dos genes que estão sendo expressos na célula. Ao utilizar o cDNA como sonda, os microarranjos podem identificar quais genes estão ativos, sobre-expressos ou reprimidos de maneira precisa, fornecendo informações valiosas sobre a expressão gênica diferencial entre células normais e tumorais.

Portanto, a utilização de cDNA permite melhor análise e quantificação da expressão gênica nas amostras de microarranjos, o que justifica sua escolha como a sonda mais informativa para este método.

Em genética, DNA complementar (cDNA) é o DNAsintetizado a partir de uma molécula de RNA mensageiro, cujos íntrons já foram removidos, ou seja, o mRNA já passou pelo processo de splicing, sendo uma reação catalisada pela enzimatranscriptase reversa.

Após isolar um mRNA é inserido um primer para que a enzima transcriptase reversa se ligue e sintetize a fita única de DNA a partir do molde de RNA, gerando um hibrido complementar de DNA-mRNA e antiparalelo. O RNA é depois degradado pela RNase H, que degrada parcialmente a cadeia de RNA. A DNA polimerase I sintetiza novos fragmentos de DNA usando, como iniciadores, os fragmentos de RNA (deixados pela RNase) associados à cadeia simples de DNA. Por fim, a DNA ligase liga os fragmentos de DNA da nova cadeia, originado uma cadeia dupla de DNA complementar (cDNA).

A tecnologia de microarray é baseada na hibridização entre alvos livres marcados derivados de amostras biológicas e um array de muitas sondas de DNA imobilizadas em uma matriz sólida. Os alvos são produzidos a partir de mRNA de amostras biológicas por transcrição reversa, marcados com fluoróforos específicos (Cy3 e Cy5) e co-hibridizados com as sondas de DNA por 16 horas. Os sinais resultantes da hibridização são detectados por um feixe de laser, para a aquisição de imagem. Posteriormente, os sinais são quantificados, integrados e normalizados com softwares específicos e refletem o perfil de expressão para cada amostra biológica.

A técnica de PCR em tempo real foi desenvolvida recentemente para estudos envolvendo expressão gênica e trata-se de um método de análise que mede o acúmulo dos produtos de PCR a medida que vão sendo produzidos, e dessa maneira, quantifica as cópias de mRNA dos genes estudados. Essa técnica tem recentemente alcançado um nível de sensibilidade, confiabilidade e praticidade que suporta seu uso como um bioinstrumento de rotina para quantificação de expressão gênica, sendo atualmente considerado o método mais apropriado para confirmar os dados gerados por microarray (Provenzano & Mocelllin 2007).

R. bras. Bioci., Porto Alegre, v. 8, n. 1, p. 64-72, jan./mar. 2010