Sobre o preparo de amostras a serem observadas em microscóp...

Vamos analisar as afirmativas para entender a questão sobre o preparo de amostras para observação em microscópio eletrônico de transmissão.

A alternativa correta é a Alternativa A.

Vamos detalhar o porquê:

I. O glutaraldeído é utilizado como fixador primário devido à sua habilidade de estabelecer ligações entre proteínas através dos seus grupos aldeídos, o que torna esta molécula bi-funcional. Especificamente, os grupamentos aldeídos do glutaraldeído reagem com lisinas em proteínas adjacentes, além de interagirem com lipídeos, carboidratos e ácidos nucleicos.

Essa afirmativa é correta. O glutaraldeído é uma escolha comum como fixador primário em preparações para microscopia eletrônica de transmissão (TEM) porque é eficaz em estabilizar proteínas ao formar ligações cruzadas entre elas, especialmente com resíduos de lisina. Ele também interage com outros componentes celulares como lipídios, carboidratos e ácidos nucleicos, ajudando a preservar a integridade estrutural da amostra.

II. O tetróxido de ósmio é um fixador secundário e se liga especificamente às proteínas promovendo a sua agregação. Protocolos de visualização dos microtúbulos celulares incluem a fixação por tetróxido de ósmio a 4°C. Além disto, este metal pesado acrescenta densidade e contraste ao tecido biológico.

Essa afirmativa é incorreta. O tetróxido de ósmio é realmente usado como um fixador secundário em protocolos de TEM, no entanto, ele é mais conhecido por reagir fortemente com lipídios, particularmente nas membranas celulares, o que melhora a retenção de membranas e adiciona contraste devido à sua alta densidade eletrônica. A menção de que ele se liga especificamente a proteínas é incorreta, pois sua principal função é a fixação de lipídios.

III. Um protocolo geral para preparação de amostras envolve a fixação primária com glutaraldeído; lavagem em tampão; fixação secundária com tetróxido de ósmio; desidratação com séries de alcoóis (30%, 50%, 70%, 95% e absoluto); transição para solvente óxido de propileno; infiltração da resina com um aumento progressivo das concentrações de óxido de propileno e diminuição das concentrações da resina e finalmente secagem.

Essa afirmativa é incorreta. Embora o protocolo descrito seja próximo do que se utiliza na prática de preparação de amostras para TEM, a infiltração da resina geralmente ocorre com um aumento progressivo das concentrações da resina e uma diminuição das concentrações de óxido de propileno, não o contrário. A descrição final sobre a secagem também não é precisa, pois geralmente a amostra é polimerizada em temperatura elevada.

Portanto, a única afirmativa completamente correta é a I, justificando assim que a resposta correta é a Alternativa A.

Espero que esta explicação tenha ajudado a entender melhor o tema e como as técnicas de fixação e preparação de amostras são essenciais para a microscopia eletrônica de transmissão. Se precisar de mais esclarecimentos, estou à disposição!

Sobre o preparo de amostras a serem observadas em microscópio eletrônicos de transmissão, analise as afirmativas a seguir.

I. O glutaraldeído é utilizado como fixador primário devido a sua habilidade de estabelecer ligações entre proteínas através dos seus grupos aldeídos, o que torna esta molécula bi-funcional. Especificamente, os grupamentos aldeídos do glutaraldeído reagem com lisinas em proteínas adjacentes, além de interagirem com lipídeos, carboidratos e ácidos nucléicos. Correto:

Fixação com glutaraldeído:

• Estabiliza ativamente as proteínas – Pontes de Metileno

• Reage com alguns lípidos, sobretudo fosfolípidos

• A principal causa da retenção dos ácidos nucleicos , em material fixado com glutaraldeído, parece ser a reação com as proteínas associadas

• Reage com alguns hidratos de carbono, nomeadamente glicogénio e mucopolissacáridos

II. O tetróxido de ósmio é um fixador secundário e se liga especificamente à proteínas promovendo a sua agregação. Protocolos de visualização dos microtúbulos celulares incluem a fixação por tetróxido de ósmio a 4°C. Além disto, este metal pesado acrescenta densidade e contraste ao tecido biológico.

Tetróxido de Ósmio. Errado. Pós-Fixação.Tetróxido de Ósmio (OsO4): o OsO4 protege as lipoproteínas naturais dos tecidos evitando sua ruptura e coagulação. Em relação às proteínas, a ação do tetróxido de ósmio ainda é pouco conhecida. O ósmio estabiliza e contrasta especialmente os fosfolipídios constituintes da membrana citoplasmática. Atua sobre os ácidos graxos insaturados (com dupla ligação) desses fosfolipídios. Este fixador tem um papel importante na contrastação inicial da amostra, não devendo a exposição dos tecidos ser muito prolongada. O OsO4 é altamente cancerígeno, devendo ser manipulado com todos os equipamentos de proteção necessários, como capela de exaustão, luvas e máscara.

III. Um protocolo geral para preparação de amostras envolve a fixação primária com glutaraldeido; lavagem em tampão; fixação secundária com tetróxido de ósmio; desidratação com séries de alcoóis (30%, 50%, 70%, 95% e absoluto); transição para solvente óxido de propileno; infiltração da resina com um aumento progressivo das concentrações de óxido de propileno e diminuição das concentrações da resina e finalmente secagem. Errado. Fixação, desidratação, impregnação/infiltração, corte, montagem, hidratação, coloração.

Gabarito: A (se somente a afirmativa I estiver correta).