Sobre os processos de ultramicrotomia, analise as afirmativ...
I. No processo de ultramicrotomia, o espécime é cortado em fatias finas para serem observadas em microscópios eletrônicos. Neste processo, as fatias são geradas com uma espessura mínima de 300 nm, de forma que os elétrons gerados pelo microscópio eletrônico de varredura sejam capazes de atravessar a amostra para a geração das imagens.
II. No processo de crioultramicrotomia, as amostras são congeladas em nitrogênio líquido e fatiadas utilizando lâminas também resfriadas. O processo de congelamento deve ser rápido de forma que a água contida dentro das células seja vitrificada em um sólido amorfo prevenindo a formação de cristais que podem danificar as células. No entanto, ao contrário da ultramicrotomia, as amostras não devem ser previamente fixadas com aldeídos, além de não ser indicado para a localização de estruturas ou antígenos por protocolos de imunocitoquímica ou análises por raios X.
III. Ultramicrótomos possuem uma série de lâminas de vidro ou diamante que, por meio de um braço mecânico, fatiam as amostras imobilizadas em blocos de resina ou de parafina. Vibrações devem ser evitadas utilizando mesas anti-vibrações e todo o processo deve ser feito com lâminas embebidas em fluido, sendo a água destilada o fluido mais utilizado.
Assinale:
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Gabarito comentado
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A alternativa correta é a C.
Vamos entender o porquê.
Afirmativa I: No processo de ultramicrotomia, o espécime é cortado em fatias finas para serem observadas em microscópios eletrônicos. Neste processo, as fatias são geradas com uma espessura mínima de 300 nm, de forma que os elétrons gerados pelo microscópio eletrônico de varredura sejam capazes de atravessar a amostra para a geração das imagens.
Essa afirmativa está incorreta. No processo de ultramicrotomia, as fatias são extremamente finas, geralmente com espessuras entre 50 a 100 nm, e não 300 nm. Esse nível de espessura é necessário para que os elétrons no microscópio eletrônico de transmissão possam atravessar a amostra e criar uma imagem. Note que o microscópio eletrônico de varredura (MEV) não requer cortes tão finos, mas o de transmissão (MET) sim.
Afirmativa II: No processo de crioultramicrotomia, as amostras são congeladas em nitrogênio líquido e fatiadas utilizando lâminas também resfriadas. O processo de congelamento deve ser rápido de forma que a água contida dentro das células seja vitrificada em um sólido amorfo prevenindo a formação de cristais que podem danificar as células. No entanto, ao contrário da ultramicrotomia, as amostras não devem ser previamente fixadas com aldeídos, além de não ser indicado para a localização de estruturas ou antígenos por protocolos de imunocitoquímica ou análises por raios X.
Essa afirmativa também está incorreta. Embora a descrição do processo de crioultramicrotomia esteja correta em relação ao uso de nitrogênio líquido e a vitrificação da água para evitar cristais, a informação de que não é indicado para a localização de estruturas ou antígenos está equivocada. Na verdade, a crioultramicrotomia é amplamente utilizada para estudos de imunocitoquímica justamente porque preserva melhor a estrutura e os antígenos do que a fixação química tradicional.
Afirmativa III: Ultramicrótomos possuem uma série de lâminas de vidro ou diamante que, por meio de um braço mecânico, fatiam as amostras imobilizadas em blocos de resina ou de parafina. Vibrações devem ser evitadas utilizando mesas anti-vibrações e todo o processo deve ser feito com lâminas embebidas em fluido, sendo a água destilada o fluido mais utilizado.
Essa afirmativa está correta. Os ultramicrótomos realmente utilizam lâminas de vidro ou diamante para cortar amostras fixadas em resina ou parafina, e a estabilidade é crucial, daí o uso de mesas anti-vibração. A utilização de fluido como a água destilada durante o corte ajuda a reduzir o atrito e evitar danos às lâminas e às amostras.
Portanto, a alternativa que indica que somente a afirmativa III está correta é a C.
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Comentários
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I - Os elétrons não atravessam a amostra para a geração das imagens.
II - É necessário, sim, que ocorra a fixação.
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