Considere que, na situação hipotética 12A3-I apresentada, na etapa
experimental em que foi realizado o procedimento de
enriquecimento do conteúdo de peptídeos presentes nas amostras
em relação a outras biomoléculas do sistema (proteínas,
carboidratos ou ácidos nucleicos), o objetivo era manter e utilizar
nas etapas subsequentes a fração rica em peptídeos e descartar a
fração que contém menos peptídeos. Assinale a opção que
apresenta um procedimento compatível com tal objetivo.

Question

Situação hipotética 12A3-I
   Deseja-se avaliar, por experimentos laboratoriais, amostras
contendo uma mistura de proteínas e peptídeos, juntamente com
outras moléculas, obtidas a partir de extratos vegetais. Em uma
das etapas experimentais, os peptídeos foram enriquecidos nas
amostras. Em outra etapa, a mistura de peptídeos foi diluída em
ácido fórmico e submetida a uma análise cromatográfica e, em
uma terceira etapa, peptídeos isolados por cromatografia foram
analisados por espectrometria de massas. Sabe-se que em todas
as amostras há um peptídeo de maior interesse, que é composto
por 10 aminoácidos, sem repetições, e apresenta absorção
máxima de luz no comprimento de onda de 215 nm. Considere que, na situação hipotética 12A3-I apresentada, na etapa
experimental em que foi realizado o procedimento de
enriquecimento do conteúdo de peptídeos presentes nas amostras
em relação a outras biomoléculas do sistema (proteínas,
carboidratos ou ácidos nucleicos), o objetivo era manter e utilizar
nas etapas subsequentes a fração rica em peptídeos e descartar a
fração que contém menos peptídeos. Assinale a opção que
apresenta um procedimento compatível com tal objetivo.  Alternativa A: precipitação de proteínas com sulfato de amônio e descarte do
sobrenadante Ou Alternativa B: separação por eletroforese em gel de acrilamida 8% com
dodecilsulfato de sódio e descarte do material que migrou em
direção ao eletrodo positivo Ou Alternativa C: filtração em membrana de náilon com poros de 0,22 µm e
descarte do material não retido no filtro Ou Alternativa D: sedimentação em solução de cloreto de sódio 0,15 mol/L e
descarte do material em solução Ou Alternativa E: precipitação com ácido tricloroacético, seguida de
centrifugação e descarte do material sedimentado

Qconcursos · Accepted Answer

Alternativa [E] precipitação com ácido tricloroacético, seguida de
centrifugação e descarte do material sedimentado  ```html
Alternativa Correta: E

A questão avalia o entendimento de técnicas para enriquecer peptídeos em uma mistura de biomoléculas. O procedimento correto para alcançar isso é a precipitação com ácido tricloroacético, seguido de centrifugação, onde se descarta o material sedimentado. Vamos explicar o porquê.

O ácido tricloroacético é um agente desnaturante e precipita proteínas ao interferir nas interações hidrofóbicas e eletrostáticas que mantêm sua estrutura. Ao centrifugar após esse tratamento, as proteínas precipitam, formando um sedimento, enquanto os peptídeos permanecem na solução. Descartando o sedimento, mantemos a fração enriquecida em peptídeos.

Agora, vamos analisar as alternativas incorretas:

A - Precipitação de proteínas com sulfato de amônio e descarte do sobrenadante: O sulfato de amônio é um agente precipitante de proteínas. Nesse caso, os peptídeos permaneceriam no sobrenadante, mas como o procedimento correto deve descartar o material sedimentado, esta não é a opção que atende ao objetivo.

B - Separação por eletroforese em gel de acrilamida com dodecilsulfato de sódio e descarte do material que migrou: Esta técnica separa moléculas por tamanho e carga. Descartar o material que migrou poderia eliminar peptídeos de interesse, já que eles podem migrar com facilidade por serem menores. Assim, não é eficaz para manter uma fração rica em peptídeos.

C - Filtração em membrana de náilon com poros de 0,22 µm e descarte do material não retido: Essa técnica retém moléculas maiores que os poros do filtro. Peptídeos, sendo menores que proteínas, passariam pelo filtro, e a separação desejada não seria feita adequadamente com esse descarte.

D - Sedimentação em solução de cloreto de sódio e descarte do material em solução: O cloreto de sódio não é um agente adequado para precipitar seletivamente proteínas ou peptídeos. Além disso, descartando a solução, perderíamos os peptídeos que permanecem dissolvidos.

Compreender o papel de cada reagente e técnica é essencial para dominar processos laboratoriais. Cada método tem características específicas que devem ser aplicadas conforme o objetivo experimental. Lembre-se de que práticas como a precipitação seletiva são cruciais para a purificação de biomoléculas em estudos analíticos.

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