Ainda com relação à situação hipotética 12A3-I, considere
que a mistura de peptídeos em solução de ácido fórmico
mencionada tenha sido injetada em um sistema de cromatografia
de alta eficiência, composto por coluna de fase reversa como fase
estacionária, e que a fase móvel seja constituída por uma mistura
de ácido fórmico 0,02 mol/L, água e acetonitrila. Durante a
eluição, a concentração de acetonitrila na fase móvel aumenta
gradativamente de 2% até 98% durante 60 minutos, a partir do
momento em que a mistura entra em contato com a fase
estacionária. Os componentes eluídos da coluna são conduzidos a
um detector de comprimento de onda único, capaz de detectar
apenas a absorvância das frações em 215 nm, comprimento de
onda característico da região ultravioleta do espectro
eletromagnético.
Considerando tais condições, assinale a opção correta.

Question

Situação hipotética 12A3-I
   Deseja-se avaliar, por experimentos laboratoriais, amostras
contendo uma mistura de proteínas e peptídeos, juntamente com
outras moléculas, obtidas a partir de extratos vegetais. Em uma
das etapas experimentais, os peptídeos foram enriquecidos nas
amostras. Em outra etapa, a mistura de peptídeos foi diluída em
ácido fórmico e submetida a uma análise cromatográfica e, em
uma terceira etapa, peptídeos isolados por cromatografia foram
analisados por espectrometria de massas. Sabe-se que em todas
as amostras há um peptídeo de maior interesse, que é composto
por 10 aminoácidos, sem repetições, e apresenta absorção
máxima de luz no comprimento de onda de 215 nm.      Ainda com relação à situação hipotética 12A3-I, considere
que a mistura de peptídeos em solução de ácido fórmico
mencionada tenha sido injetada em um sistema de cromatografia
de alta eficiência, composto por coluna de fase reversa como fase
estacionária, e que a fase móvel seja constituída por uma mistura
de ácido fórmico 0,02 mol/L, água e acetonitrila. Durante a
eluição, a concentração de acetonitrila na fase móvel aumenta
gradativamente de 2% até 98% durante 60 minutos, a partir do
momento em que a mistura entra em contato com a fase
estacionária. Os componentes eluídos da coluna são conduzidos a
um detector de comprimento de onda único, capaz de detectar
apenas a absorvância das frações em 215 nm, comprimento de
onda característico da região ultravioleta do espectro
eletromagnético.
Considerando tais condições, assinale a opção correta.  Alternativa A: O sistema descrito detectará os peptídeos com base em sua
emissão de fluorescência. Ou Alternativa B: Os peptídeos com cadeias mais longas e maior conteúdo de
aminoácidos com radicais apolares serão eluídos antes dos
peptídeos menores e mais polares.  Ou Alternativa C: O sistema cromatográfico descrito deve conter uma lâmpada
capaz de emitir radiação ultravioleta e um detector capaz de
detectar tal radiação em 215 nm. Ou Alternativa D: A análise cromatográfica descrita permite identificar a
composição de aminoácidos dos peptídeos.  Ou Alternativa E: Para que o sistema cromatográfico descrito seja eficaz na
separação de peptídeos, é necessária a adição de cloreto de
sódio à fase móvel.

Qconcursos · Accepted Answer

Alternativa [C] O sistema cromatográfico descrito deve conter uma lâmpada
capaz de emitir radiação ultravioleta e um detector capaz de
detectar tal radiação em 215 nm. ```html
Alternativa Correta: C

Vamos explorar os conceitos centrais desta questão de técnicas de laboratório, em particular no contexto da cromatografia de alta eficiência.

Resumo teórico:

A cromatografia de fase reversa é uma técnica amplamente utilizada para separar peptídeos e proteínas com base em suas propriedades hidrofóbicas. Na coluna de fase reversa, a fase estacionária é apolar, enquanto a fase móvel é polar. Peptídeos e proteínas interagem com a fase estacionária dependendo de suas cadeias laterais apolares.

Nesta questão, a fase móvel é uma mistura de ácido fórmico, água e acetonitrila, cuja concentração aumenta gradualmente durante a eluição, favorecendo a separação dos componentes com base em suas afinidades pela coluna.

O comprimento de onda de 215 nm é relevante para detectar a presença de ligações peptídicas na região ultravioleta, que é comum em peptídeos e proteínas, através da absorção de UV.

Justificativa da alternativa correta:

Alternativa C: Para que o sistema cromatográfico detecte os peptídeos, é essencial que tenha uma lâmpada que emita radiação ultravioleta e um detector que possa registrar essa radiação em 215 nm. Este comprimento de onda é característico para a detecção de ligações peptídicas. Portanto, a alternativa C está correta, pois descreve um requisito essencial para a configuração do sistema.

Análise das alternativas incorretas:

Alternativa A: Esta está incorreta, pois a questão faz referência à absorção de radiação UV em vez de emissão de fluorescência. São fenômenos distintos; a fluorescência exigiria um detector diferente.

Alternativa B: A ordem de eluição em coluna de fase reversa geralmente depende do grau de hidrofobicidade. Assim, peptídeos mais apolares (não maiores, necessariamente) seriam retidos por mais tempo, contrariando o que foi dito nesta alternativa.

Alternativa D: A análise cromatográfica em si não identifica a composição de aminoácidos dos peptídeos, mas apenas separa os peptídeos com base em suas interações com a fase estacionária.

Alternativa E: A presença de cloreto de sódio na fase móvel não é necessária em uma cromatografia de fase reversa, e poderia até interferir negativamente no processo de separação.

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