Questões de Concurso Público FIOCRUZ 2010 para Tecnologista em Saúde - Produção de Biofármacos

Um dos mais estudados sistemas de regulação da expressão gênica é o do bacteriófago lambda (λ), que possibilita o entendimento em nível molecular do funcionamento de padrões herdáveis da regulação gênica de um comutador que pode alternar-se entre dois estados estáveis de automanutenção. Em relação ao tema, analise as afirmativas a seguir.

I. Após infectar uma célula de E. coli, o bacteriófago lambda (λ), pode desenvolver dois ciclos, um chamado lisogênico, no qual há a integração do DNA viral em sítios específicos do genoma bacteriano e o outro lítico, no qual as funções do fago são intensamente expressas, levando à lise da bactéria e liberação de partículas virais que irão infectar novas células.

II. O gene cI codifica o repressor C_I que é responsável pela manutenção do ciclo lítico. A transcrição do gene cI pode ser originada por dois promotores P_RM ou P_E.

III. O produto mais importante controlado pelo promotor P_L é a proteína CRO, uma proteína regulatória com ação antiterminadora em T_L. Assinale:

O sistema de expressão heterólogo em E. coli é um método muito empregado para a produção de insumos biotecnológicos seu sucesso depende de muitos fatores: como o vetor de expressão e a sua estabilidade, o uso de promotores fortes, condições de cultivo e principalmente dos métodos disponíveis para a purificação da proteína recombinante expressa. Em relação ao tema, analise as afirmativas a seguir.

I. Os plasmídeos são encontrados em procariotos e possuem genes essenciais a sobrevivência, manutenção e reprodução bacterianas, porém podem conferir vantagens seletivas ao hospedeiro, como resistência a antibióticos, metais pesados, produção de substâncias antibióticas, degradação de compostos aromáticos, imunidade a bacteriófagos, entre outros.

II. Os plasmídeos Col têm sido os mais estudados até o momento, não só porque dirigem a produção de colicina, mas pelo seu grande potencial, como base para construção de vetores de clonagem e expressão.

III. A incompatibilidade plasmidial é uma propriedade utilizada para determinar o grau de proximidade entre os vários plasmídeos existentes. Incompatibilidade é a inabilidade de dois plasmídeos co-residentes serem estavelmente mantidos na mesma célula, na ausência de seleção externa.

Assinale:

A otimização do crescimento celular de uma cultura envolve a composição do meio de cultivo e o controle preciso de parâmetros físicos como pH, temperatura, aeração e agitação. Em relação ao tema, analise as afirmativas a seguir.

I. Alguns microrganismos são capazes de sintetizar todos os componentes orgânicos necessários para o crescimento, utilizam CO₂ como fonte principal de carbono (C-autotróficos), outros utilizam compostos orgânicos (açúcares como glicose) como fonte principal de carbono (C-heterotróficos).

II. Embora os açúcares sejam a fonte principal de carbono e energia (ATP) para bactérias heterofílicas, eles não são intermediários metabólicos no interior das células bacterianas, são fosforilados com freqüente conversão de um açúcar em outro (frutoses, pentoses), incluindo conversões tipo aminação, redução ou oxidação.

III. Muitas cepas de E. coli, sofreram deleções em determinados genes (mutações) para restringir seu uso a laboratórios. Nestes casos, certos meios seletivos são indicados para o crescimento de diferentes cepas auxotróficas, por exemplo, uma cepa mutante (auxotrófica para arginina) é incapaz de crescer na ausência deste aminoácido, outra, por exemplo, é lactose deficiente (lac- ). Em laboratórios que trabalham com microrganismos recombinantes, é comum o uso de meios de cultivo com antibióticos para a seleção dos mesmos.

Assinale:

Na literatura estão descritos, diferentes meios definidos adequados a um cultivo para produção de altas densidades celulares, para E. coli recombinante. Em relação ao tema analise as afirmativas a seguir.

I. A composição de um meio de cultura muda durante o crescimento ocorre depleções de nutrientes, mudanças na osmolaridade e secreção de metabólitos pelo microrganismo, podendo em alguns casos, serem identificadas certas mudanças na morfologia (fenotípica) e na atividade metabólica.

II. Determinadas cepas de E. coli (K-12 e derivadas) são capazes de utilizar sacarose como fonte de carbono, viabilizando a produção de biomassa em meios industriais.

III. Para atingirem-se altas concentrações celulares de E. coli recombinante é necessário o fornecimento de uma quantidade elevada de fonte de carbono (glicose) e um balanço adequado de nitrogênio e fósforo.

Assinale:

As endonucleases de restrição são proteínas de grande importância dentro da tecnologia do ADN recombinante, sendo fundamentais, por exemplo, na análise da estrutura dos cromossomos, seqüenciamento de longas moléculas de ADN, isolamento de genes e na criação de novas moléculas de ADN que podem ser posteriormente clonadas em distintos tipos de vetores. Em relação ao tema, analise as afirmativas a seguir.

I. Um pedaço de ADN, produzido pela ação de uma enzima de restrição, também pode ser clivado especificamente em fragmentos menores por ação de outra enzima de restrição.

II. A maioria das enzimas de restrição reconhece sequências de dois a seis pares de bases e hidrolizam uma ligação fosfodiéster na fita de ADN, a exemplo da Pst I que é um palíndromo.

III. As enzimas de restrição são amplamente encontradas em uma grande variedade de procariotos. Sua função básica é reconhecer uma sequência de bases específica na fita simples de ADN em lugares determinados, fazendo cortes no eixo de simetria abruptos ou cortes assimétricos coesivos.

Assinale: