A extração de ácidos nucleicos, isolamento do DNA ou RNA,
é um processo que pode ser realizado em diferentes Ɵ pos de
amostras. Existem vários métodos, cada um deles é destinado
a aplicações distintas. A metodologia usada para detecção de
um vírus com genoma RNA, por exemplo, pode não ser a mais
adequada para fins diagnósticos ou para a prática de PCR de protozoários. Assim, os métodos podem ter diferentes desempenhos
sobre a extração de ácidos nucleicos, purifi cando o material para
realizar uma análise adequada. Baseado nos conceitos de extração de ácidos nucleicos, é INCORRETO afi rmar que
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A necessidade de quantificação molecular de amostras se
tornou rotina em numerosos patógenos virais e circunstâncias
clínicas incluindo infecções crônicas como o HIV, HCV e HBV para
os quais a carga viral pode indicar a progressão da infecção e a
resposta do paciente à terapia. Entretanto, o cálculo da carga viral
para uma amostra pode variar significativamente entre diferentes
ensaios PCR em Tempo Real quantitativo. A alternativa que NÃO
explica a variação é:
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Em setembro de 2022 foi manchete no mundo e no Jornal O
Globo: “Poliomielite: Nova York declara estado de emergência
após detectar vírus em esgoto. Patógeno já foi encontrado em
cinco condados do estado depois de um homem não vacinado ter
sido diagnosticado com a paralisia, no primeiro caso dos EUA em
quase uma década.” A Organização Mundial de Saúde orienta que
a vigilância ambiental forneça um alerta precoce sobre vírus em
circulação na população e recomenda testes em águas residuais
não tratadas como parte da vigilância ambiental. A metodologia
que NÃO é recomendada para esta finalidade é:
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A descoberta da Reação em Cadeia da Polimerase (PCR –
“Polymerase Chain Reaction”) em 1986 permitiu consolidar nas
últimas duas décadas o desenvolvimento de novas linhas de
pesquisa básica e aplicada na área de reativos para diagnóstico.
Esta técnica permite, a partir de uma pequena quantidade de
ácido nucleico, amplificar diversas vezes em escala exponencial
a região alvo aumentando a quantidade de material a ser analisada viabilizando assim a detecção da presença ou ausência de
vírus, bactérias ou qualquer sequência de interesse. Baseado na
metodologia de PCR para o diagnóstico, a partir da detecção de
retrovírus, para um ensaio mais sensível e específico é correto
afi rmar que:
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O sequenciamento genético é uma técnica desenvolvida
nos anos 70 e ganhou força em meados da década de 80 com o
sequenciamento de Sanger. No entanto, foi com o surgimento
do Sequenciamento de Nova Geração (NGS) que houve uma
revolução na maneira de se realizar a análise do DNA. As metodologias de sequenciamento de DNA que são consideradas de
nova geração:
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As limitações dos métodos de sequenciamento de primeira
geração levaram ao desenvolvimento de tecnologias de sequenciamento de nova geração, que são capazes de realizar sequenciamento paralelo massivo de DNA. O sequenciamento de segunda
e de terceira geração são denominados:
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A implementação do Teste de Amplificação de Ácidos Nucléicos (NAT) para triagem em bancos de sangue reduz o risco
transfusional de agentes virais como HIV, HCV, HBV entre outros.
É correto afirmar que:
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Para garantir o desempenho de um produto de diagnóstico
molecular, se faz necessário o processamento de controles
positivo, negativo e interno. Os controles minimizam possíveis
erros técnicos, contaminações, resultados falso negativos e
falso positivos, além de garantir uma avaliação do desempenho
do produto. Caso um produto de diagnóstico molecular possua
VLP (“Virus Like Particle”) como controle em sua composição, é
correto afi rmar que:
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Durante as últimas décadas, o desenvolvimento de novos
insumos e equipamentos permitiram a evolução da PCR convencional para um novo sistema que amplifica e detecta os produtos
de PCR em Tempo Real, tornando esta técnica a mais utilizada no
momento para o diagnóstico molecular. Sobre a PCR em Tempo
Real, uma inovação tecnológica resultante da PCR convencional,
é correto afi rmar que:
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A técnica de amplificação em cadeia da polimerase (PCR) é
composta por três etapas: desnaturação da dupla fita de DNA,
anelamento dos oligonucleoơ deos e extensão da cadeia. É correto afirmar que:
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Diferentes sistemas e fluorescências podem ser utilizados
para a técnica de PCR em Tempo Real. Historicamente, o PCR em
Tempo Real vem evoluindo em relação a quantidade de filtros
e, consequentemente, capacidade de multiplexação de alvos.
Neste senƟ do, um pesquisador pretende desenvolver um ensaio
pentaplex, sem referência passiva, para diferenciar diferentes
patógenos. Visando um ensaio diagnóstico com alta sensibilidade
e especificidade, a combinação de fluoróforos viável em relação
ao espectro de fluorescência de um equipamento de PCR em
tempo Real de 6 canais. É correto afirmar que:
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Em sistemas onde se usa a referência passiva, para uniformizar e normalizar a absorção da fluorescência em toda a placa, o
filtro D (≈610 nm) não fica disponível para a reação multiplex. É
correto afirmar que:
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Atualmente, a PCR em Tempo Real é uma das técnicas mais
utilizadas para diferentes diagnósticos e exames como: identifcação de agentes infecciosos, alterações dos cromossomos, determinação de paternidade, genealogia, identificação de pessoas
ou amostras, síndromes genéticas, propensão a doenças (testes
prediƟ vos) etc. Sobre esta técnica para a fi nalidade diagnóstica
é INCORRETO afirmar que:
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O 6º Padrão Internacional da OMS (Organização Mundial de
Saúde) e National Institute for Biological Standards and Control
(NIBSC), para RNA do vírus da hepatite C (HCV) para técnicas de
amplificação de ácido nucleico (NAT), código NIBSC 18/184, é destinado para a calibração de reagentes de referência secundários
contendo plasma de HCV processado em HCV NAT. O padrão
compreende de plasma humano liofilizado e HCV. O HCV foi
proveniente de uma doação de período de janela positivo para o
genótipo 1a do RNA do HCV de alto título. O padrão foi liofilizado
em alíquotas de 1,1 mL e armazenado a -20 °C. O material foi
calibrado em Unidades Internacionais (UI), em paralelo com o
5º Padrão Internacional da OMS para RNA do HCV para NAT,
em colaboração de um estudo envolvendo 19 laboratórios em
todo o mundo. Apresentação do painel: 257.000 UI/frasco (5,41
log10 UI/frasco).
Incerteza: a unidade atribuída não carrega uma incerteza associada à sua calibração. A incerteza pode, portanto, ser considerada
como sendo a variância do peso do frasco após o enchimento
e foi determinada como sendo de +/- 0,19%. Sobre o painel é
correto afirmar que:
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SHERLOCK é uma ferramenta de diagnóstico MPOC (“Molecular Point of Care)” baseada em CRISPR para detecção de
moléculas únicas de alvos de ácidos nucleicos. Essa metodologia
funciona programando enzimas CRISPR-CAS especiais para detectar a presença de uma assinatura específica de ácido nucleico
em uma amostra através da detecção direcionada no amplicon.
Sobre SHERLOCK é correto afirmar que:
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As complexas questões atuais de pesquisa exigem uma
profundidade de informação que ultrapassa a capacidade das
tecnologias tradicionais da PCR. A terceira geração de PCR, a PCR
digital ou dPCR, reduz essa lacuna por ser uma técnica simples e
prática. Sobre dPCR é INCORRETO afi rmar que:
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No Brasil, segundo a Portaria 34/2014 da ANVISA, o teste de
ácido nucleicos, na triagem de doadores de sangue, tem como
objetivo detectar o material genético do Vírus da Imunodeficiência Humana (HIV), Vírus da Hepatite C (HCV) e o Vírus da
Hepatite B (HBV), circulante no plasma do doador. Quanto ao
desenvolvimento de novas gerações de ensaios NAT baseados
em metagenômica por Sequenciamento de Nova Geração (NGS)
é correto afirmar que:
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A primeira vez que a maioria da população começou a ouvir
falar de variantes do coronavírus, ainda circulava as primeiras variantes em diferentes ondas. Em novembro de 2020, a variante do
SARS-CoV2 que primeiramente começou a circular no Brasil foi:
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Sabemos que, na prática científica, sempre existirão abreviaturas, acrônimos e siglas, como também termos técnicos
específicos na rotina de laboratório, e que muitas vezes são mencionados rapidamente. Com certeza, há nomes e siglas que são
de fácil entendimento, outras são de uso comum no nosso meio
acadêmico, contudo, existem algumas que não são devidamente
compreendidas, o que pode levar a erros. O desconhecimento do
real significado dos termos pode levar a uma aplicação indevida.
É INCORRETO afi rmar que:
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Um indivíduo masculino de 25 anos, após procurar um
Centro de Testagem e Aconselhamento (CTA) foi diagnosticado
com HIV, sendo encaminhado para o ambulatório de Imunologia
do Hospital Universitário Gaffrée Guinle. Após consulta com o
infectologista, foi realizada a quantificação da carga viral, sendo
104 cópias/mL. Este paciente não apresentava nenhuma contraindicação para o início do tratamento antirretroviral. Os testes de
carga viral se baseiam em genes do HIV, os quais podem ou não
ser alvo de anƟ rretrovirais. A resistência a antirretrovirais pode
acarretar mutações no genoma do HIV. Para os alvos no genoma
do HIV e tratamento indicado para este paciente o correto é:
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