A técnica de ELISA é muito utilizada na imunologia para o t...

A alternativa correta para a questão é Alternativa E. Vamos entender por quê.

Contexto e Explicação do Tema:

A técnica de ELISA (Enzyme-Linked Immunosorbent Assay) é amplamente utilizada para detectar e quantificar substâncias como proteínas, peptídeos, anticorpos e hormônios. No caso específico do ELISA indireto, essa técnica é usada para detectar a presença de anticorpos específicos no soro do paciente.

No ELISA indireto, a ordem correta dos reagentes e onde o anticorpo secundário se liga é crucial para o sucesso do teste. Vamos detalhar a função de cada componente:

1. Antígeno conhecido: Este é o primeiro reagente que se adiciona ao poço da placa de microtitulação. Ele se adere à superfície do poço.

2. Soro do paciente: Contém os anticorpos que se deseja detectar. Após a adição do antígeno, o soro do paciente é adicionado. Se os anticorpos específicos estiverem presentes, eles se ligarão ao antígeno.

3. Anticorpo secundário: Este é um anticorpo que se liga ao anticorpo do paciente. Ele é conjugado com uma enzima que catalisa uma reação de cor quando o substrato é adicionado.

4. Substrato: Finalmente, o substrato da enzima é adicionado. A reação enzimática gera um sinal detectável, geralmente uma mudança de cor, indicando a presença do anticorpo específico.

Importante destacar que o anticorpo secundário no ELISA indireto se liga à região constante do anticorpo do paciente. Essa ligação específica é crucial para a detecção correta.

Análise das Alternativas:

Alternativa E:

Certa! A sequência está correta: 1. Antígeno conhecido, 3. Soro do paciente, 4. Anticorpo secundário, 2. Substrato. Além disso, o anticorpo secundário se liga à região constante do anticorpo do paciente.

Alternativas Incorretas:

Alternativa A, C: A sequência dos componentes está incorreta. Elas também mencionam a ligação do anticorpo secundário em outra região ou não específica.

Alternativa B: Apesar de a sequência estar correta, menciona que o anticorpo secundário se liga à região variável do anticorpo do paciente, o que não está correto. O anticorpo secundário se liga à região constante.

Alternativa D: A sequência e a localização de ligação estão incorretas. O anticorpo secundário não se liga à parede do poço da placa de microtitulação.

Espero que essa explicação tenha esclarecido as dúvidas sobre a técnica de ELISA indireto e como ela é aplicada em testes imunológicos. Caso tenha mais questões ou precise de mais detalhes, estou à disposição!

Questão excelente!

Existem vários modelos de testes de ELISA; em sua forma mais simples,

chamada ELISA indireto, um antígeno aderido a um suporte sólido (placa de

ELISA) é preparado; a seguir coloca-se sobre este os soros em teste ( ex. soro

humano), na busca de anticorpos contra o antígeno. Se houver anticorpos no

soro em teste ocorrerá a formação da ligação antígeno-anticorpo, que

posteriormente é detectada pela adição de um segundo anticorpo dirigido

contra imunoglobulinas da espécie onde se busca detectar os anticorpos

(humana, no caso), a qual é ligada à peroxidase. Este anticorpo anti-IgG, ligado

à enzima denomina-se conjugado. Ao adicionar-se o substrato apropriado

para a enzima (isto é, H2O2 dissolvida em uma substancia química que dá uma

reação colorida quando H2O2 é desdobrada). Os orifícios onde ocorreu a

reação antígeno-anticorpo apresentam uma coloração (variável dependendo do

substrato).

No ELISA indireto, a ordem correta de colocação dos reagentes e onde o anticorpo secundário se liga é a seguinte:

• Antígeno conhecido: O antígeno específico para o qual se deseja detectar anticorpos é adsorvido no poço da placa de microtitulação.
• Soro do paciente: O soro do paciente, que pode conter anticorpos específicos para o antígeno, é adicionado ao poço. Se os anticorpos estiverem presentes, eles se ligarão ao antígeno adsorvido.
• Anticorpo secundário: Um anticorpo secundário conjugado com uma enzima é adicionado ao poço. Esse anticorpo secundário é específico para a região constante do anticorpo do paciente e se ligará a ele, caso o anticorpo primário (do paciente) já esteja ligado ao antígeno.
• Substrato: O substrato da enzima é adicionado ao poço. A enzima presente no anticorpo secundário catalisará a reação do substrato, gerando um sinal detectável, como uma mudança de cor.