A imunodetecção de proteína é uma técnica analítica usada pa...

A alternativa correta é a Alternativa E.

Vamos agora entender os motivos e os conceitos envolvidos nesta técnica de imunodetecção de proteínas, também conhecida como Western Blot.

A imunodetecção de proteínas é um método amplamente utilizado para identificar e quantificar proteínas específicas em uma amostra. O procedimento padrão envolve várias etapas que devem ser realizadas em uma ordem específica para garantir a precisão e a especificidade da detecção.

Explicação da Alternativa Correta (E):

A alternativa E descreve corretamente os passos da imunodetecção de proteínas:

• Preparação da amostra: A amostra de proteína é preparada para ser carregada em um gel.
• Eletrotransferência: A separação das proteínas é realizada por eletroforese, onde as proteínas são transferidas para uma membrana, geralmente de nitrocelulose ou PVDF.
• Bloqueio: Para evitar a ligação inespecífica dos anticorpos, a membrana é bloqueada usando uma solução de bloqueio, frequentemente contendo albumina ou leite desnatado.
• Incubação: A membrana é incubada com um anticorpo primário específico para a proteína de interesse.
• Detecção: O anticorpo primário está conjugado a uma enzima, como a fosfatase alcalina, e a detecção é feita usando um substrato como NBT/BCIP que produz um produto colorido visível.

Justificativa das Alternativas Incorretas:

Alternativa A: Apesar de incluir alguns passos corretos, a sequência está incorreta. A detecção da fosfatase alcalina com OPD/TMB é usada frequentemente com peroxidase, não com fosfatase alcalina.

Alternativa B: Esta alternativa omite a etapa de bloqueio, que é crucial para prevenir a ligação inespecífica dos anticorpos.

Alternativa C: A ordem dos passos está errada, além de mencionar "transferência" antes da preparação da amostra, o que não faz sentido. Ainda, a detecção por HRP usando ECL é específica para quimioluminescência, não colorimetria.

Alternativa D: A sequência de passos está incorreta. O bloqueio deve ocorrer antes da incubação com o anticorpo primário e não após a eletrotransferência.

Compreender cada uma dessas etapas e a sequência correta é fundamental para a realização bem-sucedida da técnica de Western Blot, garantindo a detecção precisa da proteína de interesse.

As etapas são realizadas nessa ordem: Você tem a amostra e faz extração (equivalem a preparação da amostra), eletroforese SDS-PAGE ,tranferência para a membrana (equivale a  eletrotransferência,),bloqueio com BSA, incubação com anticorpo, revelar membrana (equivale a detecção).

Gabarito: E