A técnica da reação em cadeia da polimerase (PCR) permite qu...

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Q1912975
Biologia Moléculas, células e tecidos , Hereditariedade e diversidade da vida , Núcleo interfásico e código genético ,
Ano: 2022 Banca: FGV Órgão: PC-AM Prova: FGV - 2022 - PC-AM - Perito Criminal - 4ª Classe - Biologia |
Q1912975 Biologia
A técnica da reação em cadeia da polimerase (PCR) permite que, em poucas horas, quantidades mínimas de material genético possam ser amplificadas milhões de vezes.
O gráfico a seguir mostra, de maneira simplificada, as etapas da PCR.
Imagem associada para resolução da questão
Com relação à técnica da PCR, assinale V para a afirmativa verdadeira e F para a falsa.
( ) Na etapa I, desnaturação, uma enzima termoestável rompe as pontes de hidrogênio que unem as duas fitas do segmento de DNA a ser amplificado.
( ) O número II indica a etapa de anelamento, onde ocorre a participação de primers específicos. Os primers são oligonucleotídeos de fita simples de DNA.
( ) Durante a etapa de extensão (III), a enzima DNA-ligase atua adicionando novos nucleotídeos à extremidade de cada primer.
As afirmativas são, respectivamente,
Alternativas

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A questão traz um gráfico com a demonstração de maneira simplificada das etapas da PCR, a técnica da reação em cadeia da polimerase, que permite a amplificação do material genético em milhões de vezes. Pede-se a análise de três afirmativas trazidas sobre a técnica de PCR, e a alternativa correta sobre a ordem respectiva das afirmativas. A técnica de PCR permite amplificar um único fragmento de DNA por milhares de vezes em poucas horas, podendo obter cópias de parte do DNA que seja possível detectar um objeto de estudo. A reação de PCR possui algumas etapas que devem ser seguidas para que as cópias apresentem uma sequência correta.
1.Extração: extrair o material genético por meio de aquecimento até ser desnaturada.
2.Desnaturação: adição de base nitrogenada e polimerase (enzima), aquecimento com temperatura de 95° para separação das fitas, e resfriamento, com temperatura de 50°.
3.Anelamento: união das fitas de DNA (primers) nos lados complementares e amplificação da nova molécula.
4.Polimerização: extensão definitiva do DNA com a enzima adicionando as bases nitrogenadas. ; Amabis & Martho. Fundamentos da Biologia Moderna. 1ª ed. São Paulo, SP. Ed. Moderna, 1991)



Fonte da imagem: site kasvi.com.br

 

Analisando as afirmativas:

(F) Na etapa I, desnaturação, uma enzima termoestável rompe as pontes de hidrogênio que unem as duas fitas do segmento de DNA a ser amplificado. Falsa

(V) O número II indica a etapa de anelamento, onde ocorre a participação de primers específicos. Os primers são oligonucleotídeos de fita simples de DNA. Verdadeira. No anelamento, que ocorre depois da redução da temperatura, há união das fitas do DNA em complementação.

(F) Durante a etapa de extensão (III), a enzima DNA-ligase atua adicionando novos nucleotídeos à extremidade de cada primer. Falsa. Na etapa III, ocorre a síntese de moléculas de DNA de fita dupla, com extensão definitiva desse DNA.
 

As afirmativas são, respectivamente,

A) F, V e F. CORRETA. Todas as afirmativas estão assinaladas corretamente.

B) F, V e V. Incorreta. A terceira afirmativa é falsa.

C) V, F e F. Incorreta. A primeira afirmativa é falsa, e a segunda verdadeira.

D) V, V e F. Incorreta. A primeira afirmativa é falsa.

E) F, F e V. Incorreta. A segunda afirmativa é verdadeira, e a terceira é falsa.


Gabarito do Professor: A

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Com relação à técnica da PCR, assinale V para a afirmativa verdadeira e F para a falsa.

(F) Na etapa I, desnaturação, uma enzima termoestável rompe as pontes de hidrogênio que unem as duas fitas do segmento de DNA a ser amplificado.

Na etapa de desnaturação, as pontes de hidrogênio são rompidas devido à alta temperatura, e não por ação enzimática como apontado na afirmativa.

(V) O número II indica a etapa de anelamento, onde ocorre a participação de primers específicos. Os primers são oligonucleotídeos de fita simples de DNA.

Na etapa de anelamento ocorre a hibridação entre os primers e o molde de DNA, indo ao encontro do exposto na afirmativa.

(F) Durante a etapa de extensão (III), a enzima DNA-ligase atua adicionando novos nucleotídeos à extremidade de cada primer.

A enzima DNA polimerase que age na etapa de extensão, e não uma ligase.

As afirmativas são, respectivamente: F, V e F - gabarito letra A.

Na etapa I, desnaturação, o rompimento das pontes de hidrogênio ocorre devido à elevação da temperatura (aprox. 98 graus C). Na etapa III, A DNA polimerase termoestável (taq polimerase) ea responsável por adicionar nucleotideos à cadeia de DNA em extensão

o que rompe as fitas são as altas temperativas e não enzima

I. Na etapa I, desnaturação, uma enzima termoestável rompe as pontes de hidrogênio que unem as duas fitas do segmento de DNA a ser amplificado.

  • Falso. Na etapa de desnaturação, não há a participação de uma enzima. O aquecimento da amostra a altas temperaturas (94-97°C) é suficiente para romper as pontes de hidrogênio entre as bases nitrogenadas das duas fitas de DNA, separando-as.

II. O número II indica a etapa de anelamento, onde ocorre a participação de primers específicos. Os primers são oligonucleotídeos de fita simples de DNA.

  • Verdadeiro. A etapa de anelamento (II) é caracterizada pela hibridização dos primers às fitas simples de DNA. Os primers são, de fato, oligonucleotídeos de fita simples complementares à região de interesse do DNA que se deseja amplificar.

III. Durante a etapa de extensão (III), a enzima DNA-ligase atua adicionando novos nucleotídeos à extremidade de cada primer.

  • Falso. A enzima responsável por adicionar novos nucleotídeos à extremidade dos primers durante a extensão é a DNA polimerase, e não a DNA ligase. A DNA ligase tem a função de unir fragmentos de DNA, enquanto a DNA polimerase sintetiza novos filamentos de DNA.

 

Resumindo:

  • A desnaturação ocorre por meio de aquecimento, sem a participação de enzimas.
  • O anelamento envolve a hibridização dos primers às fitas simples de DNA.
  • A extensão é realizada pela DNA polimerase, que adiciona nucleotídeos aos primers.

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