Para a preparação de amostras para microscopia
confocal, alguns protocolos utilizam rotineiramente
algum fluoróforo, como a fluoresceína, ligada a um
anticorpo secundário para reconhecer especificamente
uma proteína. Esse tipo de técnica permite a
localização precisa de uma determinada proteína
dentro da célula. O pesquisador pede ajuda ao
tecnólogo para realizar a técnica em que ele
consiga marcar duas proteínas diferentes na mesma
célula e localizar suas posições. Qual a técnica a ser
utilizada nesse caso?
Para a formação de uma imagem optimal no
microscópio confocal, o que ocorre, respectivamente,
na seção ótica, na resolução horizontal e no
contraste da imagem quando se aumenta o diâmetro
do pinhole posicionado antes do fotomultiplicador
em um microscópio ótico confocal?
O decaimento da fluorescência observado nos
fluoróforos é motivo de preocupação para os
pesquisadores que utilizam tais moléculas e também
para os seus fabricantes. Ao se deparar com uma
amostra suscetível a photobleaching quais são os parâmetros que o técnico pode alterar na análise da
amostra no intuito de minimizar o photobleaching.
Ao analisar uma amostra de tecido corado com DAPI
e Alexa 488 que foram analisadas por microscopia
confocal, foi detectada uma sobreposição de espectro
de emissão e uma imagem com muito brilho também
foi gerada no plano focal. Assinale a opção que
apresenta uma possível correção desses dois fatores.