Um dos pontos mais importantes na reação de PCR é a razão ó...

A alternativa incorreta sobre a razão ótima entre iniciadores e DNA molde na reação de PCR é a alternativa B. Vamos entender o porquê e analisar as demais opções.

Alternativa B: "A complexidade do DNA molde usado na reação não é um fator que interfere na razão oligo/DNA molde".

Comentário: Esta afirmação é incorreta. A complexidade do DNA molde é sim um fator que interfere na razão oligo/DNA molde. Moléculas de DNA mais complexas podem exigir diferentes concentrações de iniciadores para garantir uma amplificação eficiente. Por isso, a complexidade do DNA é um aspecto crucial a ser considerado ao otimizar a reação de PCR.

Alternativa A: "Caso a razão oligo/DNA molde seja alta, ocorrerá a formação de dímeros de oligos".

Comentário: Esta afirmação está correta. Quando a concentração de iniciadores (oligos) é muito alta em relação ao DNA molde, é comum que eles se emparelhem entre si (formando dímeros de oligos) ao invés de se ligarem ao DNA molde, comprometendo a eficiência da reação de PCR.

Alternativa C: "Caso a razão oligo/DNA molde seja baixa, o produto do PCR não será acumulado exponencialmente".

Comentário: Esta afirmação também é correta. Se a concentração de iniciadores for muito baixa em comparação ao DNA molde, a quantidade de produto amplificado não atingirá níveis exponenciais, pois não haverá iniciadores suficientes para a replicação contínua das fitas de DNA.

Alternativa D: "Uma razão oligo/DNA molde baixa resulta na renaturação das fitas recém-sintetizadas, após a desnaturação, levando a baixa eficiência da reação".

Comentário: Correto novamente. Com uma baixa razão oligo/DNA molde, as fitas de DNA recém-sintetizadas têm maior chance de se renaturar (reatar as fitas simples) após a etapa de desnaturação. Isso diminui a eficiência, pois impede que os iniciadores se liguem adequadamente ao DNA molde.

Alternativa E: "Para a maioria dos casos, a concentração de iniciador não deve ser muito maior que 0,5 μM".

Comentário: Esta afirmação está correta. Em geral, a concentração de iniciadores é otimizada em torno de 0,1 a 0,5 μM. Concentrações significativamente maiores podem levar à formação de produtos inespecíficos, como dímeros de oligos, enquanto concentrações muito baixas resultam em baixa eficiência de amplificação.

Em resumo, a alternativa B é a única incorreta porque desconsidera a influência da complexidade do DNA molde na determinação da razão entre iniciadores e DNA molde, um fator essencial para uma reação de PCR eficiente.